论文部分内容阅读
精子发生过程中经历了从形态到生化的复杂变化，在这一过程中有一系列的特定基因按严格的时空顺序转录和翻译，因此寻找和研究不同发育阶段的差异表达的基因，将有助于最终阐明精子发生的机理，并为控制生育和不育机理的探索提供新的线索。 本文的研究策略是利用本组通过大鼠曲细精管分段分离结合DDRT-PCR所得的代表差异表达基因的EST和根据基因组信息学的数据分析并设计的EST为探针，采用常规方法筛选大鼠和人睾丸cDNA文库，共完成了8个新的全长cDNA的克隆及测序(HSD-4，RSD-4，RSD-5，RSD-6，RSD-7，DNA J样蛋白，tSH3p13及HSD-3)，在此基础上进行基因表达谱分析和部分基因的原核表达及其免疫组化定位。 HSD-4和RSD-4是以基因组信息学的数据分析并设计的引物扩增人睾丸RT-PCR产物所得的cDNA片段为探针，从人和大鼠的睾丸cDNA文库得到的两个新的全长cDNA。其中HSD4 cDNA序列全长2497bp，含一个738bp的完整开放阅读框，编码245个氨基酸，分子量为28.2KD。将HSD-4 cDNA序列送GenBank，登录号为AF162680。RSD-4全长779bp，编码209个氨基酸。GenBank登录号为AF315468。通过序列比较，发现HSD-4／RSD-4与小鼠TRIF(ID：AB025010)明显同源，同源性高达85％以上，故认为这三个基因互为同源基因，迄今尚未见对TRIF基因的具体描述。用SMART(v．3.1)对HSD-4进行结构分析，提示在氨基酸残基18-57位以及157-180位分别含有一个RING Finger和一个ZnF结构域。 对HSD-4／RSD-4基因进行多种组织表达谱Northern blot分析显示：在8种大鼠和11种成人组织中，RSD-4只有在睾丸组织有表达，HSD-4也主要在睾丸组织中有高水平的表达。不同发育天龄的大鼠睾丸组织Northern Blot分析结果显示：以组成性表达的β-actin