腺病毒5型是一种十分有效的基因治疗载体,广泛应用于体内体外的基因治疗实验。腺病毒5型能够感染很多细胞,包括分裂细胞和静止细胞。它的侵入机制主要包括两个阶段。首先,腺病毒以其knob蛋白和柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)结合,锚定在细胞表面;然后,其五邻体基底部(Penton base)再与整合素结合,整合素作为辅助分子介导了病毒内吞进入内涵体小泡[1]。整个过程中,knob起了粘附病毒的作用,五邻体起了内化病毒的作用,它们隔司其职,相互配合,两者对腺病毒的感染至关重要。腺病毒用于基因治疗的一个主要问题是缺乏靶向性。为了解决这个问题,一个经常采用的策略是在knob上进行靶向改造,使它不与CAR结合,而与目标受体结合。为了研究knob的结构与功能,本研究表达了knob,CAR并制备了knob的单克隆抗体。本研究利用大肠杆菌BL21(DE3)表达了knob蛋白。通过Ni2+-NTA系统的纯化,纯度可达95%以上。同时,我们利用本实验室昆虫细胞表达的CAR蛋白,ELISA结果显示,两者有着明显的结合,提示所表达的knob至少有部分是维持了天然的构象。抗knob单克隆抗体的制备,除了可以用于knob改造的研究外,还可以用于常规腺病毒5型的检测及其相关研究。