益气化瘀法对体外培养子宫肌瘤细胞生物学特性影响的研究

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目的:通过人子宫平滑肌瘤细胞/肌细胞体外培养,建立子宫肌瘤有限细胞系,采用血清药理学方法,研究具有益气活血化瘀功效的中药复方化瘤方对体外培养人子宫肌瘤细胞/肌细胞增殖特性的影响以及对子宫肌瘤增殖相关蛋白(PCNA)、凋亡相关蛋白(BCL-2、Fas/Fas-L)、激素受体(ER、PR)表达的影响,并与米非司酮、宫瘤宁对照,深入探讨化瘤方治疗子宫肌瘤的作用机制,进一步论证益气活血化瘀法治疗子宫肌瘤的合理性。 方法:制备化瘤方、宫瘤宁、米非司酮药物血清,采用组织贴块法/消化法进行人子宫肌瘤细胞体外培养。采用细胞计数法绘制生长曲线、分裂指数,观察化瘤方药物血清对体外培养子宫肌瘤细胞增殖状况的影响;流式细胞仪进行细胞周期的分析,并检测凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构变化;采用免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原(PCNA),凋亡相关基因(BCL-2)蛋白、Fas及其配体Fas-L及雌孕激素受体(ER、PR)的变化。 结果: 1.成功进行子宫肌瘤细胞/肌细胞体外原代及传代培养。 2.细胞生长曲线、分裂指数曲线显示:化瘤方药物血清对正常子宫肌细胞分裂、增殖无影响(P>0.05),但能明显抑制子宫肌瘤细胞的生长、增殖(P<0.05)。 3.使肌瘤细胞凋亡指数增加(P<0.05),并能改变肌瘤细胞的超微结构,出现凋亡现象。 4.化瘤方药物血清影响细胞生长周期,将子宫肌瘤细胞的增殖阻滞在G<,0>/G<,1>期,使G<,1>期细胞增多,而S期细胞减少。 5.能明显下调PCNA、BCL-2、Fas及其配体Fas-L蛋白在肌瘤细胞中的表达(P<0.001),同时能够降低肌瘤细胞中ER和PR的表达(P<0.001)。 结论: 1.子宫肌瘤细胞是化瘤方发挥治疗作用的靶细胞; 2.化瘤方通过降低PCNA蛋白表达、影响细胞周期,抑制子宫肌瘤细胞增殖; 3.通过调节BCL-2、Fas-L蛋白表达诱导子宫肌瘤细胞凋亡; 4.化瘤方使肌瘤细胞内ER、PR表达下调,影响E<,2>、P效应的发挥。
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