猪细小病毒(Porcineparvovirus，PPV)是引起猪繁殖障碍的主要病原之一，广泛分布于世界各地，给养猪业造成了巨大的经济损失。目前，各国的研究者加强了PPV基因组结构和蛋白质的研究。 NS1蛋白是PPV的主要非结构蛋白，由NS1基因编码。NS1蛋白对PPV早期和晚期的基因转录都发挥着重要的调节作用。本研究以PPVYK株基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增得到NS1全序列基因，将其克隆到pMD18-T质粒载体，获得重组质粒pMD18-T-NS1，并进行序列测定和同源性分析。结果表明，NS1基因全长1989bp，编码662个氨基酸。氨基酸序列中含有在PPV复制过程中起重要作用的保守基序GKRN，并有3个潜在的糖基化位点NISN、NFSN及NLTR，分别位于356-359、446-449和513-516位氨基酸。PPVYK株NS1基因与其它PPV毒株NADL-2(4973)株、NADL-2(5075)株、NADL-2(5034)株和Kresse株进行比较，核苷酸同源性分别为98.3％、99.9％、99.9％及99.7％，氨基酸同源性分别为99.7％、99.7％、99.7％及97.7％，证实NS1基因具有高度保守性。 根据PPV基因组序列结构，选择了PPVYK株保守序列NS1基因作为探针模板，将NS1基因纯化，利用地高辛标记PPVYK株NS1基因PCR产物和重组质粒pMD18-T-NS1，制备了NS1基因PCR产物探针、克隆NS1探针和线性质粒探针，三种核酸探针的标记效率都达到了0.1pg/μL。特异性试验检测结果表明，这三种探针都能与PPVDNA发生特异的阳性杂交，而与对照病毒PRV、PCV、PRSSV和HCV的核酸杂交呈阴性。敏感性试验检测结果表明，NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针PPVDNA最低检出量为0.5pg/μL，线性质粒探针敏感度为1pg/μL。两种DIG标记的NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针特异性强、敏感性高，可用于PPV的检测。 随着分子生物学的发展，核酸探针以其敏感性和特异性必将成为快速诊断PPV的一种方法。