【摘 要】
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甘蓝Brassica oleracea在世界各地均有种植,在蔬菜生产中占据着重要的地位,受到小菜蛾Plutella xylostella的严重危害。近期,利用转基因植物表达害虫靶标基因的ds RNA的害虫防治手段受到了越来越多的关注,在害虫防治中具有着巨大的潜力。因此,有必要发展表达ds RNA的转基因甘蓝来控制小菜蛾。本实验以小菜蛾保幼激素环氧水解酶(juvenile hormone epoxi
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甘蓝Brassica oleracea在世界各地均有种植,在蔬菜生产中占据着重要的地位,受到小菜蛾Plutella xylostella的严重危害。近期,利用转基因植物表达害虫靶标基因的ds RNA的害虫防治手段受到了越来越多的关注,在害虫防治中具有着巨大的潜力。因此,有必要发展表达ds RNA的转基因甘蓝来控制小菜蛾。本实验以小菜蛾保幼激素环氧水解酶(juvenile hormone epoxide hydrolase,JHEH)和蜕皮激素受体(ecdysteroid receptor,ECR)基因为靶标基因,分别选取了437 bp和412 bp大小的片段作为RNA干扰的靶标片段,在片段两端加入att B1和att B2序列,利用Gateway同源重组技术成功构建了表达相应ds RNA的植物表达载体。本实验优化了甘蓝种子的灭菌体系,得出的最佳灭菌浓度为3%次氯酸钠。在优化的灭菌体系基础上,利用农杆菌转化法构建表达小菜蛾靶标基因片段ds RNA的转基因甘蓝,并通过PCR和RT-PCR技术分别对于转基因甘蓝的基因组和反转录c DNA的验证,成功的获得了4株能够表达Px JHEH靶标片段ds RNA和2株能够表达Px ECR靶标基因片段ds RNA的转基因甘蓝。在用获得的转基因甘蓝离体叶片对小菜蛾4龄幼虫进行饲喂5天后小菜蛾的死亡率分别达到了15.00%和6.67%,其中取食了表达Px JHEH靶标片段ds RNA的小菜蛾死亡率显著高于取食普通叶片的小菜蛾。相应的靶标基因表达量受到了抑制,其中取食了表达Px JHEH靶标片段ds RNA甘蓝的小菜蛾体内的Px JHEH的表达量为原来的55.30%,取食了表达Px ECR靶标片段ds RNA甘蓝的小菜蛾体内的Px ECR的表达量为原来的64.33%。以上结果表明通过转基因甘蓝表达害虫靶标基因ds RNA的方法是可行的,为今后的小菜蛾的防治提供了新的思路和方向。
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