乳腺癌的发病率呈逐年上升的趋势，目前已是女性最常见的恶性肿瘤，是女性恶性肿瘤死亡原因的第二位。目前新辅助化疗已是治疗局部晚期乳腺癌患者的常规手段之一，其疗效是患者局部复发、远处转移和总体生存率的独立预后因子，但目前新辅助化疗的患者有效率最高仅达到800％，因此找到预测乳腺癌化疗敏感性的生物学指标异常重要。 在人类癌症的发生、发展和预后的研究中，调控性非编码微小RNA（microRNA，miRNA）的作用倍受人们关注。MiRNA有组织特异性、分化和发育的时间性以及表达特异性，可以发挥抑癌基因或类似癌基因的作用。与乳腺癌相关的microRNA中，let—7家族倍受关注。let—7最早在线虫中发现，它能调控细胞的分化和增殖的时序。let—7在乳腺癌组织中相对低表达，它能在转录后水平抑制RAS和HMGA2蛋白的表达，因此被认为是抑癌的“miRNA”。最近的文献显示let—7与肿瘤化疗耐药相关，let—7低表达的卵巢癌细胞和卵巢癌细胞系对铂类耐药。因此，深入研究let—7与乳腺癌化疗耐药之间的关系，有助于研究乳腺癌化疗敏感的预测因子，理解乳腺癌化疗耐药的机制并为乳腺癌的生物靶向治疗提供新的方向。 第一章 let—7 microRNA表达水平与乳腺癌化疗耐药关系的临床研究 目的： 研究接受含表阿霉素方案新辅助化疗的患者化疗前乳腺癌组织中let—7micorRNA的表达水平与其化疗敏感性之间的关系。 方法： 收集接受含表阿霉素方案新辅助化疗的患者化疗前的新鲜乳腺癌组织和石蜡包埋的乳腺癌组织，分别用real—time RT—PCR和原位杂交法检测乳腺癌组织中let—7 microRNA的表达水平；用乳腺B超测量化疗前后患者乳腺癌的大小以评价化疗的疗效。通过统计学分析，研究患者的乳腺癌组织中let—7 microRNA表达水平与患者化疗敏感性之间的关系。 结果： 共收集23例接受新辅助化疗患者化疗前的新鲜乳腺癌组织，化疗耐药组（cSD+cPD）为8例，化疗敏感组（cCR+cPR）为15例，Real—time RT—PCR检测let—7表达水平显示，化疗耐药组let—7表达水平明显低于化疗敏感组，差异有统计学意义（P<0．05）。收集33例接受新辅助化疗患者的石蜡包埋的乳腺癌组织，化疗耐药组（cSD+cPD）为9例，化疗敏感组（cCR+cPR）为24例，原位杂交检测let—7表达水平显示，化疗耐药组let—7表达水平明显低于化疗敏感组，差异有统计学意义（P<0．05）。 结论： let—7 microNA在对表阿霉素耐药的乳腺癌组织中相对低表达，可能作为预测乳腺癌对表阿霉素敏感性的潜在生物学因子。 第二章提高let—7的表达水平可以增加乳腺癌细胞对表阿霉素的敏感性 目的： 采用microRNA mimics转染技术提高SK—3rd球囊细胞中let—7 microRNA的表达，研究提高乳腺癌细胞系SK—3rd球囊细胞中let—7 microRNA的表达水平能否增加其对表阿霉素的敏感性。 方法： 以let—7a mimics转染let—7 microRNA几乎不表达的SK—3rd球囊细胞，采用real—time RT—PCR方法检测转染前后的SK—3rd球囊细胞中let—7的表达水平的变化、western blot方法检测let—7靶蛋白H—RAS、HMGA2的表达水平的变化以验证let—7能否成功转染SK—3rd球囊细胞并在细胞内发挥作用。采用MTT法和流式细胞术，检测转染let—7a mimics前后SK—3rd球囊细胞对表阿霉素敏感性的变化。 结果： 经过let—7a mimics转染后，SK—3rd球囊细胞中let—7表达水平提高，细胞中let—7的靶蛋白H—RAS和HMGA2的表达水平明显降低，表明let—7a mimics能够成功转染SK—3rd球囊细胞并在细胞内发挥作用。相对于阴性对照组，表阿霉素对let—7a mimics转染后的SK—3rd球囊细胞细胞活力抑制作用增强，表阿霉素对let—7a mimics转染后的SK—3rd球囊细胞的诱导凋亡作用增强。 结论： 提高乳腺癌细胞系SK—3rd球囊细胞中 let—7的表达水平可以增加其对表阿霉素的敏感性，可能作为乳腺癌潜在的生物学治疗靶点。