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本试验对延边奶山羊耳成纤维细胞体外培养体系进行了研究。试验以延边奶山羊为研究对象,采用传统的组织块贴壁培养法,成功的培养出了延边奶山羊耳部皮肤成纤维细胞系。试验通过观察组织块贴壁情况,观察原代培养细胞和传代培养细胞的形态及生长状况,绘制出延边奶山羊成纤维细胞生长曲线,以及对细胞进行染色体核研究,目的是确定该品种细胞从第5代开始至13代之间的成纤维细胞,生长状况快速良好,细胞整齐,核型数目正常,可以作为体细胞核移植以及转基因等试验的核供体。同时也从细胞水平上对延边奶山羊的这一特有地方品种进行有效的保存和利用。结果表明: 1、通过组织块贴壁培养法,成功培养出了延边奶山羊成纤维细胞系。 2、确定原代培养最适血清浓度为15%,此浓度下原代细胞游离出的时间约为7天。从组织块贴壁率的试验中可以证明,点瓶后倒置5~6小时、后加培养液以及组织块≤1mm3更利于组织块贴壁生长。 3、据观察原代成纤维细胞与传代细胞形态基本相似,都呈长梭形或细长条形,或不规则三角形,细胞群体呈旋涡状或者放射状排列。经本试验得出延边奶山羊原代成纤维细胞生长缓慢,大约7~10天左右游离出细胞,细胞平铺培养瓶底面一层大约需要20天至一个半月的时间,细胞生长较为缓慢,这与其他山羊不同。观察5代至13代之间的细胞,长势快,形态规则,细胞密集且规整。 4、绘制生长曲线显示,延边奶山羊耳部成纤维细胞成“S”型曲线生长,1~4d细胞处于潜伏期,4~7d为指数生长期,7d以后进入平台期,细胞生长缓慢,符合细胞体外生长规律。 5、对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行核型分析,结果表明其染色体数目为2n=60条,共30对,与正常山羊染色体数目相符合。但当细胞传代至14代以后,细胞染色体数目发生异常较多。 6、根据以上结果表明,建议采用延边奶山羊5代至13代之间的成纤维细胞作为核移植以及转基因等试验的核供体。