目前，喹诺酮类药物作为一类广谱抗菌药仍然被广泛应用于动物疾病的防治。随着喹诺酮类药物的大量使用，其在动物性食品中的残留问题愈发严重。由于免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、简单快捷等优点，在兽药残留检测领域受到很大的关注。免疫分析法的核心是抗体，因此，制备能识别多种同类药物的广谱性抗体至关重要。　　本研究从分泌抗沙拉沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，反转录获得cDNA，利用PCR技术扩增出单链抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因。将两段基因片段用连接臂(G4S)3连接获得单链抗体基因(ScFv)。然后，将ScFv基因导入宿主Rosetta-gami(DE3)中进行诱导表达，纯化后的ScFv抗体用间接竞争ELISA方法进行检测。结果表明，该ScFv抗体的分子量为25.67KDa，对12种氟喹诺酮类药物的IC50为8.7-143ng/mL。然后，利用YASARA软件构建了该ScFv抗体的同源模型，使用分子对接软件AutoDock4.2将该抗体与沙拉沙星等12种氟喹诺酮类药物分别进行分子对接，研究其识别机制。结果显示，该ScFv抗体的结合腔主要由CDR H1、CDR H3、CDR L1和CDR L3共同组成，关键接触氨基酸为Tyr33、Trp50、Tyr99、Tyr102、Tyr162、Trp221、Ser222和Tyr226。这些氨基酸主要通过氢键和疏水作用力与药物分子中的4-喹诺酮环、7-哌嗪环发生结合。通过对关键接触氨基酸进行虚拟突变分析，发现将CDR H3的Tyr99突变为His时，抗体与药物的结合能显著降低，亲和力明显提高。因此，采用定点突变技术对已得到的ScFv基因进行定向突变，制备出一种ScFv突变体。结果表明，该ScFv突变体大小为25.62KDa，对12种氟喹诺酮类药物的IC50为3.2-63ng/mL，灵敏度提高了1.4-7倍。二次分子对接的结果表明，该ScFv抗体的结合腔主要由CDR H1、CDR H2、CDR H3、CDR L1和CDR L3共同组成，关键接触氨基酸为Arg31、Tyr32、Tyr33、His35、Trp50、Tyr52、His99、Tyr100、Arg101、Tyr102、Trp221和Tyr226，且突变体-配体结合能均明显降低。　　综上所述，本研究基于基因工程和计算机模拟的方法，探究了抗沙拉沙星ScFv抗体的分子识别机制，并实现了对它的定向进化，为制备其他小分子物质的ScFv抗体、研究其分子识别机制及体外进化奠定了基础。