目的:本实验旨在研究华蟾素注射液(cinobufacini injection,CI)联合吡咯烷二硫基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbama,PDTC)对炎性刺激下A549细胞的增殖及LPS诱导RAW264.7细胞中炎症因子的抑制效果,并探讨其与NF-κB信号通路的相关作用机制。为华蟾素注射液联合PDTC防治炎症促进肺癌的恶化提供实验依据。方法:1.华蟾素注射液联合PDTC对A549细胞增殖的抑制效果:接种A549细胞孵育贴壁,设对照组,PDTC组,华蟾素注射液组,联合组,加药作用24h、48h后,用CCK-8法检测细胞存活率。2.华蟾素注射液联合PDTC对LPS刺激RAW264.7细胞存活率的影响:接种RAW264.7细胞孵育贴壁,设对照组,LPS刺激组,LPS刺激PDTC组,LPS刺激华蟾素注射液组,LPS刺激联合组,各处理组用脂多糖刺激2h,加药作用24h后,用CCK-8法检测细胞存活率。3.华蟾素注射液联合PDTC对炎症因子的抑制效果:将RAW264.7细胞接种于12孔板,分组加LPS诱导2h,药物孵育24h后,取上清液,用一氧化氮试剂盒检测NO的含量,ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。4.华蟾素注射液联合PDTC对炎性刺激下A549细胞增殖的抑制效果:接种A549细胞孵育贴壁,设对照组,炎性刺激组,炎性刺激PDTC组,炎性刺激华蟾素注射液组,炎性刺激联合组,并设立非炎性刺激组做对比,炎性刺激组加入LPS刺激RAW264.7细胞上清培养基,药物组分别加入上清培养基或正常培养基配制的药物,孵育48h后,用CCK-8法检测细胞存活率。5.NF-κB p65与细胞核共定位:将RAW264.7细胞接种于cofocal小皿,分组加药处理24h后,在激光共聚焦显微镜下观察nf-κbp65与细胞核定位情况。6.华蟾素注射液联合pdtc抑制iκb-α的降解:将raw264.7细胞接种于6孔板,分组加药孵育24h后,收集细胞,提取蛋白,用westernblot检测iκb-α蛋白的表达。结果:cck-8结果显示,华蟾素注射液及pdtc对a549细胞的增殖均有抑制效果,两者联合使用后,抑制作用更强(p<0.05)。lps、华蟾素注射液及pdtc对raw264.7细胞存活率没有影响(p>0.05)。消炎效果显示,raw264.7细胞加lps刺激后,各炎症因子的含量明显增加(p<0.05),华蟾素注射与pdtc对no、tnf-α、il-6、il-1β均有不同程度的抑制效果,联合使用后,抑制作用总体上高于单药组。在炎性刺激下能促进a549细胞的增殖(p<0.05),华蟾素注射液联合pdtc对炎性刺激下a549细胞增殖的抑制效果仍高于单药组(p<0.05)。激光共聚焦显微镜结果显示,经lps刺激后,raw264.7细胞中nf-κbp65的核位移明显增多,华蟾素注射液与pdtc均能抑制nf-κbp65的核位移,联合用药后抑制效果更明显。westernblot结果显示,lps能够促进raw264.7细胞中iκb-α的降解(p<0.05),经华蟾素注射液与pdtc处理后,iκb-α的降解减少,联合作用后能够提高对iκb-α降解的抑制效果(p<0.05)。结论:(1)华蟾素注射液联合pdtc能有效抑制lps诱导raw264.7细胞中no、tnf-α、il-6、il-1β的分泌,其对炎症因子的抑制效果总体上高于单药组。(2)炎性刺激下能促进a549细胞的增殖,华蟾素注射液联合pdtc能有效抑制炎性刺激下及非炎性刺激下a549细胞的增殖,其抑制效果高于单药组。(3)华蟾素注射液联合pdtc抑制炎性刺激下a549细胞增殖的作用机制可能为通过减少lps诱导raw264.7细胞中iκb-α的降解,从而抑制nf-κb的核位移,使nf-κb不能进入细胞核与no、tnf-α、il-6、il-1β相关基因结合并转录,减少了这些炎症因子的分泌,进而降低了炎性刺激对A549细胞增殖的促进作用。