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核盘菌[S.sclerotiorum(Lib.)de Bary]是油菜生产上破坏性极大的病原真菌之一,由它引起的油菜菌核病严重影响了世界上的油菜产量和品质。为给有效控制油菜菌核病提供理论和技术支撑,本论文对其病原菌——核盘菌的致病分子机理进行了初步探究,探讨了蛋白新生多肽复合物α亚基和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶Ss Ppt1对核盘菌菌核发育和致病性等的影响,主要研究结果如下。1.核盘菌新生多肽复合物α亚基负调控果胶酶基因的表达和致病力本研究克隆了新生多肽复合物α亚基的编码基因Ss NACα、利用real-time PCR方法分析了该基因在核盘菌无性发育的各时期的表达情况,同时利用基因沉默的方法对该基因的功能进行了初步研究。Ss NACα基因的c DNA的全长为615个碱基,编码1个含215个氨基酸残基的蛋白。对Ss NACα基因的无性发育阶段的表达分析表明,在菌核体积增大和成熟阶段,Ss NACα基因表达量上升迅速,在菌核的黑化阶段表达量上升至约菌丝阶段表达量的180%。本研究利用RNAi介导的基因沉默方法,获得了Ss NACα基因的沉默突变体。通过对突变体观察发现,Ss NACα基因的沉默,延缓了菌核的成熟过程并使其致病性显著增强。探究其原因发现,突变体果胶酶基因的表达量显著增加,产果胶酶的能力显著增强,这表明Ss NACα基因可以负调控果胶酶基因的表达,进而影响核盘菌的致病性。2.核盘菌磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶蛋白的生物信息学预测分析磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶是真核生物中普遍存在的一类重要的蛋白家族,通过参与调节生物初生代谢和次生代谢过程中的酰基载体蛋白的活性来最终影响脂肪酸、聚酮化合物、非核糖体多肽等的合成,并最终影响生物个体的生长发育和致病性等。本研究通过生物信息学方法挖掘出核盘菌磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因候选编码基因3个,并对其进行了同源性比较,预测了其基因产物的结构特征。为后续基因功能的研究提供思路。3.磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因Ss Ppt1影响核盘菌的无性发育和致病性在核盘菌的基因组中我们比对分析发现了1个同时含有SCOP和ACPS模块的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因Ss Ppt1,并利用RNAi介导的基因沉默的方法研究了该基因的功能。研究结果表明Ss Ppt1在菌核成熟阶段积累丰富。Ss Ppt1基因沉默突变体菌株菌丝的生长速率显著降低,且菌丝分支发生改变;突变体产生的菌核的形状改变且数量减少约一半;突变体菌株的致病力显著下降。对突变体和野生型菌株的侵染垫的诱导观察结果表明,突变体产生侵染垫的能力并没有降低,说明突变体致病力的降低可能是由于其菌丝生长速率的显著降低引起的。这些结果表明,Ss Ppt1蛋白在维持核盘菌菌丝的正常生长、菌核发育和致病性等方面发挥重要的作用。