肿瘤坏死因子a(Tumor necrosis factor a, TNFa)是一种由活化的单核/巨噬细胞分泌的多功能细胞因子,研究表明：适量的TNFa可以协助宿主抵抗微生物入侵、杀伤某些肿瘤细胞或使体内肿瘤组织发生出血坏死,但过量的TNFa与其它炎性因子一起产生多种病理性损伤,可以引起组织损伤、重症感染性休克、自身免疫性疾病等。可以说TNF-a作为一个调节生理平衡的关键细胞因子,在人类对抗肿瘤及其他疾病中扮演了“双刃剑”的角色。通过抑制TNFa的活性作用可以对与TNFa有关的疾病产生治疗作用,目前主要用于类风湿关节炎、抑制肿瘤的发生、生长和转移以及对多药耐药的治疗。以TNFa为靶点开发的药物包括有很多,这些药物从不同层次不同水平抑制TNFa的产生和发生作用从而达到抗TNFa治疗的目的。临床研究表明抗TNFa治疗的药物是安全的。本实验在我室原有抗hTNF-a表达载体的基础上,表达出可溶性hTNFa蛋白,之后用经典的细胞融合的方法获得抗hTNFa的杂交瘤细胞株；采用硫酸铵沉淀和蛋白G亲和层析法纯化腹水型单抗；采用ELISA酶链免疫分析方法测定其效价、抗体亚型和亲和力；采用MTT法测定抗体阻断hTNFa对L929细胞的细胞毒的作用和筛选拮抗型抗hTNFa单抗；流式细胞仪法测定抗体阻断hTNFa诱导L929细胞凋亡的作用。最终获得一株能稳定分泌抗hTNFa抗体的杂交瘤细胞株XB10,分泌的抗体亚型为IgG2；该抗体能高亲和力与hTNFa结合,特异性阻断hTNFa对L929细胞的细胞毒作用和抑制细胞凋亡的发生,并呈一定的剂量依赖性。用RT-PCR和PCR方法克隆出抗hTNFa的轻、重链基因,与T载体连接,测序结果与PDB库中抗体特征框架氨基酸序列相符合,是抗体的轻、重链基因。该研究为今后研制临床治疗型抗hTNFa的基因工程抗体奠定了实验基础。