论文部分内容阅读
近年来,大气压低温等离子体(cold atmospheric plasma,CAP)在医学尤其是皮肤科中的应用研究已成为国内外的研究热点。研究表明CAP可适用于皮肤伤口杀菌消毒、创伤愈合、组织再生以及治疗各种皮肤肿瘤性和炎症性疾病等。银屑病是一种常见的炎性增生性皮肤病,其发病机制尚未完全明了,现有的治疗手段均无法完全治愈银屑病。角质形成细胞(keratinocyte,KC)过度增殖,表皮增厚是银屑病皮损的特征性表现之一。研究表明CAP处理可以抑制细胞增殖,诱发细胞凋亡;此外,还有研究表明CAP中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)具有免疫调节的作用,因此推测CAP可用于治疗银屑病。本课题主要针对CAP对KC增殖的影响来研究其对银屑病的治疗作用,进行了大气压等离子体射流(atmospheric pressure plasma jet,APPJ)对Ha Ca T细胞增殖和咪喹莫特(IMQ)诱导的银屑病样小鼠模型的影响研究。主要内容和结果概括如下:1.研究APPJ装置的放电特性,使用APPJ处理培养基得到等离子体活化培养基(plasma activated medium,PAM),检测不同处理时间PAM的PH值和主要活性物质的含量。结果表明,随着处理时间延长,PAM中各种活性物质的含量逐渐增多,PH值并无显著改变。2.检测PAM对Ha Ca T细胞增殖的影响及相关作用机理。结果表明,PAM处理可以诱导细胞形态变化、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,并且这种作用是通过诱导细胞内ROS水平上升引起的,呈PAM强度依赖。3.构建两种常规的细胞炎症模型模拟银屑病皮损的炎性微环境,检测PAM对细胞增殖的影响。结果表明,与正常的Ha Ca T细胞相比,炎性状态下的细胞对相同强度的PAM更加敏感。推测是由于LPS或TNF-α诱导后,细胞内ROS水平增高,处于氧化应激状态而对PAM的耐受性降低所引起。正常Ha Ca T细胞和炎性诱导Ha Ca T细胞的共培养体系,也进一步验证其对PAM的敏感性差异。4.根据PASI评分、HE染色切片考察APPJ对IMQ诱导的银屑病样小鼠模型的治疗作用。结果表明,IMQ诱导的模型组小鼠出现典型的银屑病样皮损,APPJ处理后皮损PASI积分下降,HE染色趋于正常,表明APPJ对IMQ诱导的银屑病样小鼠模型具有治疗作用。5.通过免疫组化和免疫荧光检测APPJ对皮损局部KC增殖(Ki67)及凋亡(active caspase-3)情况的影响。结果显示,模型组小鼠表皮Ki67阳性细胞比例升高,APPJ处理后,Ki67阳性细胞比例显著降低,但表皮细胞的凋亡无明显变化。表明APPJ主要通过抑制皮损KC异常增殖来发挥治疗作用。6.采用免疫组化方法检测APPJ对银屑病样皮损局部炎性状态及血管新生情况的影响。结果显示,APPJ处理后皮损局部CD3阳性细胞浸润明显减少;炎性因子TNF-α、IL-17和IL-22表达明显降低;新生血管也明显减少。表明APPJ还可以通过抗炎、抗血管新生来发挥治疗作用。