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目的：脓毒血症的治疗工作是目前急危重症研究领域的重点难点，通过针对脓毒血症的分子生物学过程探求靶向治疗手段，对指导治疗、降低病死率、改善预后具有重要意义。建立脓毒血症血管内皮细胞模型，并应用氨茶碱对其干预，探讨氨茶碱对 Slit2/Robo4蛋白通路表达的影响作用，从而推断氨茶碱对脓毒血症血管内皮细胞的血管通透性是否有积极改善作用。 方法：根据预实验结果将人脐静脉血管内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）分为6组，低剂量脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）组、低剂量 LPS+氨茶碱组、高剂量 LPS组、高剂量 LPS+氨茶碱组、氨茶碱对照组和空白对照组。应用免疫荧光染色检测 HUVECs的 Slit2、Robo4表达情况。应用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞Robo4蛋白表达情况。 1．细胞培养和分组 复苏 HUVECs后，将 HUVECs置于 5％CO2的培养箱中贴壁培养，并将其置于37℃、95％湿度的环境中，待细胞80％融合时，通过血清饥饿法进行同步化培养 24h。随后将 HUVECs 分成低剂量 LPS 组、低剂量LPS+氨茶碱组、高剂量 LPS 组、高剂量 LPS+氨茶碱组、氨茶碱对照组和空白对照组。并置于 95％湿度、37℃的环境中，于 5％CO2的培养箱中贴壁培养 24小时。 2. 免疫荧光染色 将 HUVECs 空白对照组、2 个浓度的 LPS 组、氨茶碱对照组、氨茶碱干预的2个浓度的LPS组进行培养24h后，分别进行Robo4和Slit2蛋白的免疫荧光染色，操作参照试剂说明书进行。将染色完毕的片子用甘油进行封片，并注意避光，最后在荧光显微镜下观察图像并拍摄照片。 3．Western blot检测细胞Robo4蛋白表达将培养24小时后的高剂量LPS组、高剂量LPS+氨茶碱组、氨茶碱对照组和空白对照组4组的悬浮细胞与细胞裂解液混合，根据试剂盒说明书检测 4 组样品蛋白浓度，通过电泳，分离蛋白被转移到聚乙烯膜上。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参，使用Quantity one 4.6.2软件测量各条带灰度值，并重复实验6次。 4.反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测细胞Robo4的信使核糖核酸（Messenger Ribonucleic Acid，mRNA）表达 根据制造商的说明书，从培养24小时后的低剂量LPS组、低剂量LPS+氨茶碱组、高剂量LPS组、高剂量LPS+氨茶碱组、氨茶碱对照组和空白对照组6组中提取Robo4的总mRNA。以GAPDH为内参物，计算每个样本的Robo4的mRNA浓度，并重复实验6次。 结果：在免疫荧光染色技术下，氨茶碱组与非氨茶碱干预组比较，氨茶碱组Slit2/Robo4 蛋白表达均高于非氨茶碱干预组。氨茶碱干预的高浓度 LPS （100μg/ml）组Slit2蛋白免疫荧光强度较高浓度LPS组明显增强。氨茶碱干预的低浓度 LPS（10μg/ml）组 slit2 蛋白免疫荧光强度较低浓度 LPS 组稍有增强。在Western blot技术检测下，高剂量LPS+氨茶碱组与高剂量LPS组比较， Robo4 蛋白表达高于非氨茶碱干预组，并有显著差异（P＜0.05）。RT-PCR 技术检测下，高剂量 LPS+氨茶碱组 Robo4的蛋白表达较高剂量 LPS表达显著上升（P＜0.05），低剂量 LPS+氨茶碱组 Robo4的蛋白表达较低剂量 LPS表达显著上升（P＜0.05）。提示氨茶碱可以通过增加Slit2/Robo4蛋白的表达，进而改善血管通透性，从而改善脓毒血症。 结论：本研究结果提示LPS可降低Slit2/Robo4蛋白通路的表达，氨茶碱可促进Slit2/Robo4 蛋白通路的表达，从而推断氨茶碱对脓毒血症血管内皮细胞的血管通透性有着积极的改善作用。