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狂犬病是一种在全世界范围内流行的，传播于哺乳动物、鸟类和人的人兽共患病，一旦感染出现临床症状，几乎100％的死亡。我国绝大多数的人患狂犬病病例集中在农村地区，95％以上是由犬咬伤所致。疫苗免疫是控制狂犬病唯一有效的方法。进口疫苗安全性高，免疫效果好，但价格昂贵，适用于经济条件好的城市地区，对于经济落后的农村地区大规模接种进口疫苗不现实，农村地区缺少应用于犬的长效、安全、低廉的兽用狂犬病疫苗是狂犬病发生率高的主要原因。犬细小病毒性肠炎是犬类的一种高传染性和高致病性的疾病，可引起成年犬严重胃肠炎和幼犬心肌炎，病死率高，是危害犬的最严重的传染病之一。同样地，疫苗免疫也是控制犬细小病毒性肠炎最有效的方法之一。本研究小组针对这两种病毒成功拯救嵌合犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)。本研究旨在对重组的狂犬病病毒进行进一步的生物学特性研究，探讨其成为犬细小病毒病和狂犬病二联基因工程疫苗的可行性。 分别对携带犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒rHEP-Flury(VP2-3.0)以及同时携带狂犬病病毒双G基因和犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒rHEP-Flury(dG-VP2)进行基因鉴定，G蛋白和VP2蛋白表达的鉴定，并研究其生长特性。通过RT-PCR方法可检测到rHEP-Flury(VP2-3.0)存在VP2基因；rHEP-Flury(dG-VP2)存在双G基因和VP2基因，在第20代仍然没有丢失。利用本实验室研制的G蛋白单抗通过蛋白印迹方法可检测到rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)的G蛋白，大小与亲本株一致；利用CPV多克隆抗体通过间接免疫荧光方法检测到VP2蛋白，VP2蛋白表达在细胞胞浆中。病毒的一步生长曲线表明rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)与亲本株rHEP-Flury3.0相比较生长特性基本一致，并且rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)在第4天的滴度均高于亲本株。 在此基础上对重组病毒进行免疫原性和攻毒保护试验研究。将rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)与亲本株rHEP-Flury3.0分别制备成弱毒疫苗和灭活+佐剂疫苗，肌肉注射免疫小鼠，21天后采血分离血清，检测抗狂犬病病毒抗体与抗犬细小病毒抗体。结果表明，重组狂犬病病毒rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)免疫小鼠后均能诱导产生较高的抗狂犬病病毒抗体与抗犬细小病毒抗体水平，用狂犬病标准攻毒毒株CVS-11进行攻毒保护试验小鼠可获得80％以上的存活率。 综上所述，重组狂犬病病毒rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)具有作为新型基因工程疫苗的潜质，本研究为犬的新型多价基因工程疫苗的研制奠定了基础。