氧化还原酶占常见六大类酶的30％~35%，其中约80%为NAD(H)依赖型氧化还原酶。其在手性物质生产、羟基酸与氨基酸制备、生物传感器等方面均有重要应用。本文制备了环氧基修饰的壳聚糖磁性纳米粒子（MNP@CS-EPO），并用于固定化NADH得到磁性纳米粒子固定化的辅酶（MNP@CS-NADH），进而考察了 MNP@CS-NADH的反应活性及其与不同种类酶的相互作用特性，最终将MNP@CS-NADH用于Lactobacillus reuteri胞内NADH依赖型氧化还原酶的快速分离。　　首先，通过自组装包覆及表面修饰获得环氧基功能化的磁性纳米粒子MNP@CS-EPO，进而用于固定化 NADH获得固定化的辅酶 MNP@CS-NADH。通过透射电镜（TEM）形貌分析、红外光谱分析（FTIR）、热重分析（TG）、X射线衍射分析（XRD）、磁性能分析、zeta电位分析、形态观测、沉降性能分析等对这两种粒子分别进行了表征。结果显示，MNP@CS-EPO表面具环氧基功能基团，在去离子水中和pH5~10的缓冲液中分散性良好，平均粒径约10 nm，饱和磁化值为45.69 emu/g，具超顺磁特性；MNP@CS-NADH在去离子水中及pH2~3、5~10的缓冲液中分散性良好，平均粒径约10 nm，饱和磁化值为46.66 emu/g，并且在乳酸脱氢酶（LDH）催化过程中表现出反应活性，且能在乙醇脱氢酶（ADH）和LDH偶联体系中作为循环再生的辅酶，不断催化反应产生丙酮酸，MNP@CS-NADH总转化次数约为46.8次。　　其次，考察了时间和浓度对 MNP@CS-EPO和MNP@CS-NADH分别用于固定化ADH的影响。结果显示，ADH浓度为180μg/mL时，两种粒子均达最大固定量26 mg/g粒子和44 mg/g粒子；MNP@CS-EPO和MNP@CS-NADH均能在1~2分钟内快速完成固定化；MNP@CS-ADH、MNP@CS-NADH~ADH与游离ADH的比活之比为1.81：1：7.44。这反映了两种固定化方法中粒子与ADH作用方式和作用位点的差异对酶的空间结构会产生不同的影响，进而影响到酶的催化活性。　　第三，为研究 MNP@CS-NADH对酶的选择性相互作用，分别考察了MNP@CS-NADH与蔗糖转化酶（INV）和NADH依赖型氧化还原酶（ADH）的相互作用。结果显示，MNP@CS-NADH与ADH作用远高于蔗糖转化酶，在ADH和INV的混合蛋白中 MNP@CS-NADH可选择性亲和吸附 ADH；对MNP@CS-NADH~ADH表面ADH的脱附研究表明，pH、底物和NADH均能调控ADH的解吸，pH调控最简便，且蛋白和酶活解析率最大，分别为35.25%和31.51%。因此该方法可从混合蛋白中选择性吸附NADH依赖型氧化还原酶，并能有效脱附。　　最后，将固定化辅酶MNP@CS-NADH用于分离纯化L. reuteri胞内NADH依赖型氧化还原酶。结果表面，MNP@CS-NADH可直接从细胞破碎液中分离浓缩 NADH依赖型氧化还原酶，其中 LDH纯化倍数约为8.15，酶活回收率达48.53%；对粗酶液进行硫酸铵初步沉淀后，采用 MNP@CS-NADH可从上清中分离ADH和LDH，相对粗酶液的纯化倍数分别达到49.21和3.09，回收率分别达36.37%和32.23%，可从沉淀中分离LDH和ADH，相对粗酶液的纯化倍数分别达到8.24和2.69，酶活回收率达到5.87%和7.85%。