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抗青光眼滴眼液术前长期应用可造成结膜下细胞外基质堆积和炎症细胞增多,促进青光眼手术滤过道的瘢痕化,降低抗青光眼手术的成功率。拟前列腺素类局部降眼压药正越来越多地应用于临床,拉坦前列素是同类药物中应用最广泛的一种,局部长期滴用对滤过道瘢痕化的作用倍受眼科学者的关注。 有研究认为,拟前列腺素药可促进体外培养的睫状体平滑肌细胞结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）mRNA的表达,但此药对Tenon囊成纤维细胞CTGF的影响迄今未见报导。CTGF具有促进成纤维细胞有丝分裂、合成分泌胶原和新生血管形成的作用,是近年新发现的重要的致纤维化因子。因此研究拟前列腺素类药物对Tenon囊成纤维细胞CTGF表达的影响具有临床现实意义,有利于进一步了解药物对手术滤过道瘢痕形成的作用。 实验证明拉坦前列素可上调Tenon囊成纤维细胞基质金属蛋白酶的表达,促进胶原和其它细胞外基质的分解过程。胶原可以促进细胞移行、分化、粘附、增殖及分泌细胞外基质,参与器官纤维化的过程。胶原沉积的数量由胶原的分解和合成两个过程决定,目前该药对胶原合成的影响尚无报导。 本实验选用无防腐剂的拉坦前列素酸作用于体外培养的人Tenon囊成纤维细胞（human Tenon fibroblast,HTF）,研究拟前列腺素类药物对结缔组织生长因子的影响及其在胶原合成中的作用。 第一部分 人Tenon囊成纤维细胞的体外培养及鉴定 于白内障手术中取患者的Tenon囊组织,采用组织块贴壁培养法行原代培养。5%CO2、37℃条件下用含10%胎牛血清的低糖DMEM传代培养。采用波形蛋白抗体、成纤维细胞抗体、角蛋白抗体,应用免疫细胞化学染色和免疫细胞荧光染色方法对培养的细胞进行鉴定。 结果: 培养的绌胞生长活跃、性状表现稳定,角蛋白抗体染色阴性、波形蛋白抗体染色阳性、成纤维细胞抗体染色阳性,确认是成纤维细胞。 第二部分 拉坦前列素酸对Tenon囊成纤维细胞CTGF mRNA和蛋白表达的影响 1.于六孔培养板培养HTF细胞至完全融合后进行实验。①观察不同浓度拉坦