禽流感病毒NS1蛋白在流感病毒感染宿主细胞后大量表达,但在成熟病毒粒子中并不存在,因此被称为非结构蛋白。NS1在流感病毒感染宿主细胞的过程中发挥着十分重要的作用,主要包括抵抗宿主的免疫应答,阻止干扰素生成,进一步拮抗干扰素形成的病毒防线等。此外NS1还是禽流感病毒中重要的毒力因子,其关键位点能够影响流感病毒的致病性。NS1还能够调节mRNA的剪切和核-质输出,这些对病毒感染和复制大有帮助。NS1蛋白是禽流感病毒中关键的致病因子,能够与多种蛋白发生相互作用,改变宿主蛋白的胞内分布,进一步调节病毒的毒力和致病性。为了进一步研究NS1蛋白在禽流感病毒复制以及致病过程中的作用,本研究以H5N1型禽流感病毒的NS1蛋白为诱饵,构建了带有GST标签的重组质粒,初步优化表达条件,经纯化得到较高纯度的融合蛋白。通过GST-Pull down技术,以GST蛋白为对照,在人肺腺癌A549细胞系中筛选出更多与NS1相互作用的蛋白。为了验证潜在的互作蛋白与NS1之间的相互作用,原核表达两种蛋白,利用ELISA技术验证两蛋白间的互作;真核表达两种蛋白,利用Co-IP技术进一步验证两蛋白的互作。实验结果表明:与GST对照组比较,GST-NS1实验组出现了2条差异条带。经质谱鉴定（MAODI-TOF）,其中1个条带得到阳性结果。筛选出的互作蛋白为α-actinin 4蛋白,目前尚无其与NS1蛋白互作的相关报道。分别将两蛋白进行原核表达,ELISA验证了NS1与α-actinin 4蛋白的相互作用。结果显示,与对照组相比,实验组中OD_450nm的吸光度值与NS1蛋白的浓度呈正相关,表明NS1蛋白能够结合包被原α-actinin 4。通过将Flag-His-ACTN4质粒与HA-NS1质粒共转染进293T细胞进行免疫共沉淀实验,结果进一步验证了NS1与α-actinin 4的互作。本研究为进一步探究NS1对于禽流感病毒的致病机理奠定了基础。