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本论文主要探讨miRNA在肺腺癌发病中的作用研究,整体分为两部分：(一)研究miR-511和miR-1297调节TR1B2基因表达对肺腺癌发生发展的影响；(二)研究miR-596在细胞水平对肺腺癌发生发展及迁移的影响机制。1.miR-511/1297调节TRIB2基因表达抑制肺腺癌细胞的生长(1)miR-511/1297对TRIB2的调控作用通过免疫组织化学的方法检测TRIB2在肺腺癌组织中的表达情况,结果显示该基因在肺腺癌组织中表达明显高于正常组织,推测TRIB2作为癌基因在肺腺癌发生发展中具有重要作用。合成TRIB2相关的miRNA (miR-511/1297),将miR-511/1297分别与pcDNA-GFP-TRIB2-3’UTR共同转染肺腺癌A549细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP表达,结果表明miRNA转染组的GFP表达量明显低于对照组；Western blotting结果显示TRIB2蛋白的表达降低。表明miR-511和1297能够调节TRIB2的表达。另外,Western blotting还检测到转染miR-511和1297后C/EBPa表达升高,提示TRIB2可能通过影响C/EBPa信号因子在肺腺癌的发病中发挥作用。(2) miR-511/1297对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响在细胞水平,miR-511/1297转染肺腺癌A549细胞48h后,Real-time PCR检测到两种miRNA在细胞内的含量明显升高。MTT检测两种miRNA对肺腺癌A549细胞增殖的影响,发现转染niR-511/1297后,细胞增殖受到抑制。Hochest33258染色后,转染miR-511/1297组细胞核出现明显的凋亡形态,进一步通过Annexin V-FITC/PI双染检测细胞的凋亡率,结果显示转染miR-511/1297组细胞凋亡率明显升高。结果表明,miR-511/1297能够明显抑制肺腺癌A549细胞的增殖和促进细胞凋亡(3) miR-511/1297抑制A549细胞在裸鼠体内增殖在个体水平,通过裸鼠移植瘤实验检测到转染miR-511/1297组肿瘤生长速度较对照组明显减慢,肿瘤生长的体积和质量也明显减小,表明miR-511/1297能在个体水平抑制肺腺癌的发生和发展。2. miR-596调节MTSS1基因表达在肺腺癌发生及转移中的作用(1) miR-596对MTSS1基因表达的调控作用设计引物特异性扩增MTSS1基因的3’UTR序列,构建pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR重组载体。将miR-596与pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR重组载体共同转染A549细胞,培养48h后,荧光显微镜和流式细胞仪检测结果均表明转染miR-596组GFP表达量明显降低,提示miR-596对MTSS1基因3’UTR具有调控作用。设计并合成MTSS1基因相关的小干扰RNA(siRNA),将miR-596及siRNA转染A549细胞后,Western blotting进一步验证了miR-596对MTSS1基因表达的调控作用。同时,Western blotting还检测到转染miR-596后529位点磷酸化的Src表达升高明显,表明MTSS1基因可能通过影响Src激酶的磷酸化在肺腺癌的发病中发挥作用。(2) miR-596对肺腺癌细胞的影响miR-596转染A549细胞后,MTT检测结果显示转染miR-596组细胞增殖抑制率明显升高；Annexin V-FITC/PI双染检测到转染niR-596组细胞的凋亡率明显升高；Transwell迁移实验结果显示,转染miR-596组细胞迁移也明显下降。结果表明,miR-596能够明显抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡。综合以上两部分的研究,TRIB2和MTSS1基因可能作为癌基因在肺腺癌发病中起重要作用。在TRIB2和MTSS1基因的3’UTR端存在miRNA的调控位点,miRNA通过调控TRIB2和MTSS1基因进一步影响下游信号因子的表达,从而抑制肺腺癌细胞A549的增殖。