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目的:1.研究脑出血(ICH)后继发性脑损伤及其机制；2.探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)对ICH后继发性脑损伤的保护作用及其保护作用的机制。
方法:1.分组:将90只SD雄性大鼠随机分成假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组,每组30只,每组分成6个观察时点,分别为术后12h、1d、2d、3d、7d、14d,每个时点5只大鼠。2.造模及给药:(1)ICH对照组:采用立体定向仪把自体血50ul注入大鼠右侧尾状核制作大鼠ICH动物模型,术后每天腹腔注射生理盐水1ml,直到相应时点；(2)rhEPO治疗组:采用立体定向仪把自体血50ul注入大鼠右侧尾状核制作大鼠ICH动物模型,术后予rhEPO3000u/kg.d加入1ml生理盐水中腹腔注射,直到相应时点；(3)假手术组:手术操作程序与ICH组相同,但尾状核不注入自体血,针留置约10分钟。术后每天腹腔注射生理盐水1 ml,直到相应时点。3.术后各时点进行神经功能障碍评分。4.干湿法观察不同时点血肿周围脑组织含水量。5.放射免疫法测定不同时点血肿周围脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α含量。6.HE染色病理切片观察不同时点血肿周围脑组织病理改变。7.黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量。8.TUNEL原位染色法测定细胞凋亡,计数阳性细胞。9.数据采用SPSS13.0统计分析。结果:1.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点神经功能障碍评分变化:ICH对照组在术后12h～14d的神经功能障碍评分显著低于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后2d的神经功能障碍评分最低,与术后3d相比无统计学意义(P>0.05),与该组其他时点差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后12h～7d的神经功能障碍评分显著低于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后2d～7d的神经功能障碍评分显著高于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点中,以术后2d神经功能障碍评分最低,与术后3d相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它各时点相比差异有显著性(P<0.05)。2.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点血肿周围脑组织含水量变化:ICH对照组在术后1d～7d的脑组织含水量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后3d的脑组织含水量最高,与术后2d相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～3d的脑组织含水量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～7d的脑组织含水量显著低于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以术后2d脑组织含水量最高,与术后3d相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它各时点相比差异有显著性(P<0.05)。3.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点血肿周围脑组织IL-1β含量的变化:ICH对照组在术后12h～3d的IL-1β含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后2d IL-1β含量最高,与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后12h～3d的IL-1β含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后2d～3d的IL-1β含量显著低于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以术后2d IL-1β含量最高,与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)。4.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点血肿周围脑组织IL-6含量的变化:ICH对照组在术后1d～7d的IL-6含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后2d IL-6含量最高,与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～3d的IL-6含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后2d～3d的IL-6含量显著低于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以术后2d IL-6含量最高,与术后3d相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)。5.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点TNF-α含量的变化:ICH对照组在术后12h～3d的TNF-α含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后2d TNF-α含量最高,与术后12h、1d、3d时相比无统计学意义(P>0.05),与术后7d、14d相比差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～2d的TNF-α含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～2d的TNF-α含量显著低于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以术后2d TNF-α含量最高,与术后12h、1d、3d时相比无统计学意义(P>0.05),与术后7d、14d相比差异有显著性(P<0.05)。6.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点血肿周围脑组织SOD活性的变化:ICH对照组在术后12h～7d的SOD活性显著低于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后3d SOD活性最低,与术后2d时相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～3d的SOD活性显著低于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后1d～3d的SOD活性显著高于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以术后3d SOD活性最低,与术后2d时相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)。7.假手术组、ICH对照组及rhEPO治疗组术后各时点MDA含量的变化:ICH对照组在术后12h～7d的MDA含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以术后3dMDA含量最高,与术后2d时相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)；rhEPO治疗组在术后12h～7d的MDA含量显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05):rhEPO治疗组在术后1d～7d的MDA含量显著低于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以术后3d MDA含量最高,与术后2d时相比无统计学意义(P>0.05),与该组其它时点相比差异有显著性(P<0.05)。8.ICH对照组、rhEPO治疗组在术后各时点血肿周围脑组织HE染色病理改变:ICH对照组12h血肿周围脑组织轻度水肿,细胞间隙出现大小不等的空泡、增宽,伴有少量炎性细胞浸润。1d可见神经元数目减少,排列紊乱,神经细胞、胶质细胞轻度肿胀,可见炎性细胞浸润；2d炎性细胞浸润达高峰,以中性粒细胞为主,神经细胞高度水肿变性,呈空泡样变,尼氏体消失,神经细胞核固缩、浓染、部分神经细胞坏死、消失。3d时仍有大量炎性细胞浸润,血肿周围脑组织高度水肿、液化坏死,神经元明显变性坏死,核结构模糊,胶质细胞增生,红细胞部分溶解,大量含铁血黄素沉积,血肿边缘散在多数吞噬含铁血黄素的小胶质细胞。7d血肿明显缩小,胶质细胞明显增生。14d时以胶质细胞和血管增生为主。rhEPO治疗组1d-3d时脑组织水肿程度和炎性细胞浸润的强度均低于ICH对照组,rhEPO治疗组第7d时脑组织水肿和胶质细胞反应轻于ICH对照组。9.假手术组、ICH对照组、rhEPO治疗组在术后各时点血肿周围脑组织TUNEL染色阳性细胞数:假手术组可见少量TUNEL染色阳性的细胞；ICH对照组和rhEPO治疗组12h即可见大量TUNEL染色阳性的细胞；ICH对照组在12h～14d的TUNEL染色阳性细胞数显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；在ICH对照组各时点,以3d时TUNEL染色阳性细胞数最高,与其它各时点相比差异有显著性(P<0.05)。rhEPO治疗组在12h～14d的TUNEL染色阳性细胞数显著高于各相应时点的假手术组(P<0.05)；rhEPO治疗组在1d～14d的TUNEL染色阳性细胞数显著低于各相应时点的ICH对照组(P<0.05)；在rhEPO治疗组各时点,以3d时TUNEL染色阳性细胞数最高,与2d时相比无统计学意义(P>0.05),与其它各时点相比差异有显著性(P<0.05)。
结论:1、自体血制作SD大鼠ICH动物模型,制作方法简单,易于操作,重复性好,与人ICH病理生理变化基本一致,可作广泛使用。2、在ICH后,脑组织水肿、炎症反应、细胞凋亡及氧自由基的损伤等参与了ICH后的继发性损害。3、rhEPO能减轻ICH后脑水肿及病理损害,改善其神经功能,对ICH后脑损害具有保护作用。4、rhEPO对ICH后脑损害保护作用的机制是通过抑制继发性炎症反应、抗神经细胞凋亡、抗氧化应激损害等而发挥的。