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猪繁殖与呼吸系统综合征是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(porcine respiratory and reproductive syndrome virus, PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病自1987年在美国首次报道以来,现已遍及世界各主要养猪国家,并已成为危害养猪业最严重的传染病之一。免疫接种是预防与控制PRRS的主要措施,但弱毒疫苗存在散毒,灭活疫苗免疫效果不理想,而基因工程疫苗又普遍存在免疫原性低的缺点。纳米颗粒由于能够提高抗原刺激机体产生体液和细胞免疫的水平,作为免疫佐剂可提高疫苗对动物的免疫效果而成为免疫佐剂的研究的热点。本研究选择能够诱导机体产生中和杭体的PRRSV免疫保护蛋白GP5,根据GenBank中公布的PRRSV基因序列(EU709837),设计一对PCR引物,以浙江分离株为模板,通过RT-PCR扩增出ORF5基因全序列。依据GP5蛋白的结构特点,以PCR技术构建了缺失信号肽及三处跨膜区的重组ORF5基因,命名为g-ORF5。将g-ORF5基因定向克隆到原核表达载体pET-28a中,转化入E.coli BL21。经酶切和测序鉴定后,阳性菌株用1mMIPTG诱导表达,并优化表达条件,用Ni-NTA纯化表达的重组蛋白。结果表明,重组GP5蛋白在大肠杆菌中获得表达。纯化后经ELISA和Dot-ELISA分析,获得了能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应,具有免疫反应性GP5蛋白。用1%的柠檬酸三钠还原氯金酸溶液制备均一的15~20nm的纳米金颗粒,纯化好的GP5蛋白用双蒸水透析复性,用纳米金包被GP5蛋白,确定最佳包被pH值为9.8,最佳蛋白包被量为40μL,制备的纳米金以GP5蛋白包被,每毫升纳米金含GP5蛋白0.4mg。通过皮下、肌肉注射免疫6~8周龄ICR小鼠,并以弗氏佐剂和Tris-HCl为对照组,经间接ELISA法和MTT法检测小鼠血清中特异性抗体水平以及脾脏中T、B淋巴细胞增殖功能。体液检测结果表明纳米金包被GP5蛋白组能很好的刺激机体的抗体水平,与单独的GP5免疫组相比有极显著差异(P<0.01),但其产生特异性抗体水平不如弗氏佐剂免疫组;免疫途径(皮下注射和肌肉注射)比较发现,皮下注射能刺激机体产生更强的体液免疫水平。细胞免疫检测结果表明纳米金包被GP5蛋白能较强诱导T、B淋巴细胞增殖,与单独的GP5免疫组相比有极显著差异(P<0.01),免疫途径(皮下注射和肌肉注射)比较发现,皮下注射能更好的刺激T、B淋巴细胞的增殖。