信号分子AHLs印迹荧光探针构建及应用

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群体感应信号分子是细菌生长过程中的代谢产物,环境中菌体浓度越大分泌的信号分子越多。当浓度达到阈值后,信号分子可调控细菌毒力、致腐性、生物被膜等基因的表达。因此,检测食品环境中信号分子的含量可评估食品的细菌污染情况,对保证食品安全、降低食源性疾病的发生具有重要意义。本论文采用溶胀法制备了Eu(DBM)3Phen掺杂的羧基化聚苯乙烯荧光纳米微球(FPM),该微球平均直径约为136.8 nm。以FPM为核、Cbz-N酰基高丝氨酸内酯为模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂构建了信号分子AHLs的分子印迹荧光探针FPM@MIPs。吸附实验结果表明:FPM@MIPs探针对模板分子的最大吸附容量为50.1 mg/g,在浓度为浓度为20 mg/L时,8 min可达到吸附平衡;探针表面和内部均分布着吸附模板分子的结合位点,主要通过化学方式与模板分子结合。FPM@MIPs探针与目标物孵育7 min后荧光信号稳定,C4-HSL,C6-HSL和C8-HSL三种AHLs信号分子对探针的荧光猝灭效果好。基于FPM@MIPs建立的荧光检测方法对C4-HSL,C6-HSL和C8-HSL三种AHLs信号分子检测的线性范围为0μg/L-80μg/L,最低检出限为1.18μg/L-6.52μg/L,对牛奶样品的AHLs添加回收率为85.1%-93.1%,相对标准偏差为4.99%-8.39%。日间和日内实验结果表明该检测方法的稳定性好;8周内FPM@MIPs探针荧光性能稳定。FPM@MIPs抑制铜绿假单胞菌生物被膜实验表明:FPM@MIPs探针用量和细菌培养时间对探针抑制生物被膜形成的影响较大,温度影响较小。基于Eu(DBM)3Phen掺杂聚苯乙烯微球构建的细菌AHLs信号分子荧光探针为早期监测食品中细菌污染提供了新的方法,同时为抑制细菌生物被膜形成提供了新的材料。
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