论文部分内容阅读
目的:本研究拟选择健康志愿者骨髓单个核细胞及FLT3-ITD阳性人AML细胞株—MV4-11为对象,首先探究mTOR通路在FLT3-ITD阳性急性髓系白血病中的表达情况。在此基础上观察雷帕霉素对FLT3-ITD突变阳性的AML细胞株(MV4-11)的增殖及细胞周期的影响,并探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路及mTOR下游分子蛋白4E-BP1及p70S6K在此过程中的作用。方法:取MV4-11细胞,依据加入雷帕霉素浓度的不同分为对照组及实验组,培养24小时后,用CCK-8法检测白血病细胞的增殖活性,流式细胞技术检测白血病细胞周期,western-blot方法检测mTOR、4E-BP1、p70S6K及磷酸化蛋白的表达情况,RT-PCR检测mRNA水平的表达情况,并用单因素方差分析统计数据。结果:1.MV4-11细胞中mTOR、4E-BPl和p70S6K的磷酸化水平明显增高,mTOR途径被激活;2.10nmol/L-200nmol/L的雷帕霉素对携带FLT3-ITD突变的白血病细胞具有明显的生长抑制作用,IC50为87.2nmol/L。影响其周期的分布,G0/G1细胞比例明显上升(P﹤0.05)。10nmol/L-200nmol/L的雷帕霉素可明显降低MV4-11细胞中p70S6K、4E-BP1的mRNA的水平,同时对4E-BP1、p70S6K的蛋白水平及磷酸化蛋白水平的下调也很明显。较高浓度的雷帕霉素刺激后细胞24h后,mTOR、p-mTOR蛋白水平及mRNA水平均明显降低(P<0.05)。结论:MV4-11细胞中存在mTOR通路的激活,mTOR靶向抑制剂雷帕霉素可引起MV4-11细胞的增殖抑制作用,影响其细胞周期的分布,诱导出现G0/G1期阻滞,具体机制可能与mTOR信号通路相关。