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目的:乳腺癌对世界女性造成的身心伤害早已不容乐观。乳腺癌的发生、发展是由多基因、多通路、多反应相互作用的结果,其发病率和病死率呈现逐年上升的趋势。肿瘤的增殖速率、发生转移及转移部位不同直接影响着乳腺癌患者的生存期。近年来乳腺癌患者的发病年龄趋向于年轻化,发生侵袭、转移的机率大大增加,导致许多患者就诊时已经失去了手术时机,直接影响着患者总生存期。所以抑制肿瘤的生长、阻断肿瘤的转移,对提高患者的生存率、改善生活质量发挥着至关重要的作用。然而肿瘤血管生成是引发恶性肿瘤发生、发展、转移的根本源头,所以抑制乳腺癌细胞的血管生成对治疗乳腺癌具有极其重大的意义。其中核因子-Kappa B(NF-κB)可调节血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,而去泛素化酶对于NF-κB的调节至关重要。有研究发现NF-κB不仅能够在胃癌、甲状腺癌、乳腺癌中促进VEGF的表达,还能够促进淋巴结的转移。去泛素化酶OTUD7B能够阻止NF-κB激活,而NF-κB能够调节癌细胞迁移、侵袭、血管内皮生长因子的表达等。所以明确去泛素化酶OTUD7B与乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及VEGF表达之间的关系,可能为治疗乳腺癌提供新的方法。方法:构建慢病毒小干扰RNA沉默载体(LV3-si-h OTUD7B)及对照载体(LV3-NC),构建带有绿色荧光蛋白标签的人OTUD7B表达质粒(pEGFP-h OTUD7B)及对照质粒(pEGFP-CI)。用包含LV3-si-h OTUD7B、LV3-NC、pEGFP-h OTUD7B、pEGFP-CI慢病毒液分别感染MCF-7细胞。MTS法检测OTUD7B对MCF-7细胞增殖的影响;细胞划痕实验评价OTUD7B对MCF-7细胞迁移能力的影响;流式细胞术PI染色法检测OTUD7B对MCF-7细胞周期的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测OTUD7B对MCF-7细胞细胞质NF-κBP65和细胞核NF-κBP65的表达水平的调节;RT-PCR检测OTUD7B对VEGF m RNA的相对表达水平的影响;ELISA检测OTUD7B对MCF-7乳腺癌细胞分泌VEGF的调节。应用SPSS19.0统计软件进行处理,所有数据以均数±标准差(?)表示,均数比较采用t检验或单因素方差分析(One-way ANOVA),以P<0.05为差异有统计学意义。结果:通过MTS法检测细胞增殖显示,转染pEGFP-h OTUD7B后,MCF-7乳腺癌细胞增殖受到抑制,转染LV3-si-h OTUD7B后,MCF-7乳腺癌细胞增殖得到促进。细胞划痕实验表明,转染pEGFP-h OTUD7B后,MCF-7乳腺癌细胞迁移受到抑制,转染LV3-si-h OTUD7B后,MCF-7乳腺癌细胞迁移能力升高。流式细胞术PI染色检测细胞周期结果提示pEGFP-h OTUD7B可调节MCF-7细胞周期阻滞在G1期。Western blot结果分析显示,与阴性对照组及正常对照组相比,pEGFP-h OTUD7B能够下调MCF-7乳腺癌细胞核蛋白NF-κBP65的表达水平,而细胞质内NF-κBP65却无明显差异。RT-PCR结果提示,在m RNA水平,pEGFP-h OTUD7B抑制了VEGF的表达。ELISA法检测MCF-7细胞条件培养基中的VEGF含量结果显示,与阴性对照组及正常对照组相比,pEGFP-h OTUD7B组条件培养基中VEGF含量低。结论:OTUD7B能够抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移能力,可调节MCF-7乳腺癌细胞阻滞于G1期,同时还可抑制MCF-7乳腺癌细胞对VEGF的表达和分泌。