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以透明质酸钠(SH)粗品为原料,采用Na OH溶液碱化处理后再经过超滤得到医用级SH纯品。采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)法表征SH纯品结构,稀溶液粘度法测定SH纯品粘均分子量,热重分析(TG)法测定SH纯品热稳定性,紫外分光光度计测定SH纯品葡萄糖醛酸含量,库马斯亮蓝法测定SH纯品蛋白质含量,紫外分光光度计测定SH纯品核酸含量,MTT细胞计数和显微观察法测试SH纯品的体外HEK293细胞毒性。正交设计实验和单因素实验,研究碱处理反应温度、反应时间和Na OH溶液浓度对SH纯品各项指标(葡萄糖醛酸含量、蛋白质含量、核酸含量、粘均分子量和产率)的影响程度和机理,筛选出符合医用标准的SH纯品。通过平板菌落计数法对去除菌体前后样品计数研究碱处理超滤工艺去除SH粗品中添加的菌体情况,通过传统半数组织细胞感染量TCID50法和荧光定量PCR(qPCR)方法分别研究碱处理超滤工艺去除SH粗品中添加的病原体情况。研究结果表明:碱处理反应温度是影响SH纯品粘均分子量的关键因素,碱处理反应温度在60℃左右,可以得到高分子量的SH纯品,继续升高碱处理反应温度,SH纯品粘均分子量和产率下降明显。而碱处理反应温度对SH纯品蛋白质含量和核酸含量却没有太大的影响,表明在一定的碱处理反应时间后,SH粗品中的杂蛋白及其核酸得到充分的降解。NaOH溶液浓度对SH纯品的葡萄糖醛酸含量影响较大,当Na OH溶液质量百分比浓度为0.2%时(70℃,90 min),SH纯品葡萄糖醛酸含量达到46.17%,而粘均分子量为1.49×106,蛋白质含量为0.04%,核酸OD值为0.63,产率为40.75%,继续增加Na OH溶液浓度,SH纯品葡萄糖醛酸含量以及产率下降明显,表明葡萄糖醛酸受到破坏。反应时间对SH纯品蛋白质和核酸含量影响最明显,随反应时间增加,SH粗品中更多的杂蛋白以及核酸分子降解成小分子并被超滤掉。因此,提纯SH粗品的最佳碱处理反应条件是:碱处理反应温度为60℃,反应时间为60 min,Na OH溶液质量百分比浓度为0.2%;所提纯的SH纯品葡萄糖醛酸含量为46.87%,而粘均分子量为1.60×106,蛋白质含量为0.05%,核酸OD值为0.33,产率为65.35%,达到医用SH纯品标准。此最佳SH纯品的FTIR谱图与SH标准谱图一致,热分解反应温度为210.5℃,体外对HEK293细胞无明显毒性。碱处理超滤工艺通过碱处理杀灭并分解细菌成小分子物质,再经过超滤除去,达到了有效灭菌的效果。传统TCID50病毒过半数死亡实验结果显示:碱处理超滤工艺通过碱处理灭活病原体后再经超滤除去,SH纯品中几乎没有病原体存在。同时实验结果显示SH纯品经过qPCR反应得到的扩增曲线是一条平直线,说明没有DNA扩增,对照病毒梯度浓度的曲线可以看出没有基因残留,表明碱化超滤处理去除病毒的效果非常理想。以Na OH碱化水解处理SH粗品中杂蛋白、核酸、细菌和病毒成分,再通过超滤方法可以得到SH纯品。与CTAB方法和氯苯酶解方法相比,该提纯方法工艺操作流程简单,解决了目前SH提纯工艺复杂的问题;此外,碱处理超滤法提纯的SH产品纯度高,粘均分子量高,残余蛋白质及核酸含量极低,无细菌和病毒,达到医用SH纯品标准,具有医学领域应用前景。