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第一部分高迁移族蛋白HMGB1的表达与人乳腺癌细胞放射敏感性的关系研究目的：研究HMGB1的表达对人乳腺癌细胞放射敏感性的影响。方法：构建人乳腺癌MCF-7-sh-HMGB1及阴性对照模型MCF-7-NC稳转细胞模型。将shRNA进行合成克隆入pGPU6/GFP/Neo shRNA载体中,将合成之后的载体命名为pGPU6/GFP/Neo-HMGB 1和pGPU6/GFP/Neo-shNC。HMGB1低表达和阴性对照稳定转染细胞系采用600ug/ml G418筛选5周,挑选克隆扩增获得,获得的稳定转染细胞命名为MCF-7-shHMGB1和MCF-7-NC,采用RT-PCR和WB检测其HMGB1的干扰效率,克隆形成实验检测MCF-7-shHMGB1和MCF-7-NC细胞系的放射敏感性。结果：稳定转染细胞系的荧光纯度为99%,MCF-7-sh-HMGB1与阴性对照组MCF-7-NC和空白亲本组相比,mRNA相对表达量为(0.12975+0.0314)vS.(0.9625±0.0476) vs.(1)。.HMGB干扰后其mRNA表达为亲本的12.5%,亲本细胞与MCF-7-NC间无明显差异；蛋白表达方面HMGB1显著低于MCF-7-NC组,克隆形成显示HMGB1干扰组的放射敏感性显著提高,MCF-7-NC和MCF-7-shHMGB1的F2为(0.7756±0.0016) vs. (0.5732±0.0031) (p<0.01); DO 为(2.7555±0.0810) vs. (2.4807±0.0331*) (p<0.05); Dq为(3.1689±0.1431) vs. (0.7225±0.0210*) (p<0.05)。结论：成功构建了人乳腺癌MCF-7-sh-HMGB1及MCF-7-NC稳转细胞模型,MCF-7-shHMGB1稳定下调HMGB1的表达,MCF-7-NC无明显下调；干扰HMGB1的表达导致MCF-7细胞的放射敏感性显著增强。第二部分下调IMGB1的表达增强了人乳腺癌细胞放射敏感性的机制研究目的：探讨HMGB1调控人乳腺癌细胞放射敏感性的分子机制,为乳腺癌的防治提供新的有效靶点,从而为临床治疗提供理论依据。方法：采用稳定干扰细胞模型MCF-7-sh-HMGB1及阴性对照模型MCF-7-NC进行机制研究,相对端粒长度采用realtime-PCR,目的蛋白表达采用Western blot,端粒酶活性采用PCR-ELISA。细胞增殖采用CCK-8检测。细胞周期与凋亡采用流式细胞术检测,DNA损伤灶点的表达采用免疫荧光-共聚焦检测。活性氧ROS采用活性氧检测试剂盒(荧光法)检测。结果：下调HMGB1的表达增加了MCF-7细胞的放射敏感性,减少了hTERT和cyclinD1的集聚。MCF-7、MCF-7-shHMGB1和MCF-7-NC的相对端粒长度分别为0.8574±0.0812、0.6763±0.0610和1,MCF-7-shHMGB1组与MCF-7-NC相比,相对端粒长度明显缩短(***p<0.001)；与MCF-7组相比结果也类似(*p<0.05)。MCF-7-NC与MCF-7-shHMGB1二者端粒酶活性分别为1.6155±0.1512和1.169±0.0924,干扰HMGB1后导致MCF-7端粒酶活性明显下降(*p<0.05),而且显著抑制了细胞增殖。在未照射时,MCF-7-NC和MCF-7-shHMGB1细胞的S期的比例分别为(44.090±5.78)%和(29.080±4.234)%；在6Gy照射后6h,12h,24h进行检测,MCF-7-NC和MCF-7-shHMGB1细胞的G2/M分别为(29.790±3.291)%、(23.324±4.580)%、(28.592±2.673)%VS(34.293±4.231)%、(31.959±3.265)%、(35.653±5.297)%,两者差异具有显著性意义,而其余细胞周期间无明显差异。MCF-7-NC和MCF-7-shHMGB1的凋亡比例分别为(5.00±0.848)%和(25.500±1.272)%,下调HMGB1增加了凋亡水平(**p<0.01)。在早期阶段,HMGB1也参与了活性氧的调控。HMGB1通过改变端粒结合蛋白的水平来调控端粒稳态,如TPP1、TRF1、TRF2。HMGB1的下调同时抑制了ATM和ATR信号通路。结论：以上结果显示下调HMGB1的表达破坏了人乳腺癌的端粒稳态,增强了放射敏感性,抑制了DNA损伤修复,抑制了细胞生长、促进其凋亡,HMGB1可能是人乳腺癌放射治疗潜在的新靶点。第三部分人乳腺癌组织中HMGB 1的表达与临床病理特征相关性分析目的：比较HMGB1在乳腺浸润性导管癌患者的肿瘤组织与癌旁组织中的表达差异,并分析HMGB1蛋白表达水平与病理分级、淋巴结转移、总体预后等相关临床病理特征的关系,为乳腺癌的治疗寻找新的靶标。方法：收集武汉大学中南医院病理科存档的72例乳腺癌患者的组织标本切片,入组标准：我院肿瘤科2001-7至2011-8收治的存有完整蜡块组织的首诊乳腺癌患者；未行术前新辅助化疗,所有患者均行病理诊断确诊为浸润性导管癌；接受标准术后辅助治疗；无其他部位原发肿瘤；随访时间截止为2013-1。利用免疫组化法检测患者癌组织与癌旁组织中HMGB1的表达差异,并分析HMGB1蛋白的表达与乳腺癌患者的年龄、绝经状态、肿瘤大小、病理分级、激素受体水平、淋巴结转移、M分期、总体生存状态的相关性。Kaplan-Meier方法分析HMGB1蛋白的表达对累积生存率的影响。结果：HMGB1的阳性表达与年龄、绝经状态、病理分级、雌激素受体状态、HER-2受体状态、淋巴结转移分期及M分期无明显相关性,与肿瘤的增殖能力、孕激素受体状态正相关,与累积生存率负相关,具有统计学意义(P<0.05)。结论：HMGB1的表达与乳腺癌的增殖正相关,其高表达促进肿瘤生长,且与预后负相关,但需要进一步扩大样本量及延长部分样本的随访时间。