FSH诱导绵羊排卵效果差异的研究

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绵羊经外源激素FSH诱导排卵后,排卵效果差异大且不稳定的问题由来已久,严重影响了种羊养殖效益。为此,能够找出对FSH诱导绵羊排卵效果差异的关键因素,揭示其遗传机制对加快种羊快速扩繁有重要的经济和现实意义。早期研究表明,LH和FSH协同作用可调控母羊卵泡生长发育及形成黄体;E2以自分泌方式刺激卵泡发育;AMH浓度可预测腔前卵泡和有腔卵泡的数量。FSH需与FSHR结合才能在生殖调控过程中发挥关键作用;POMC基因能够直接或间接参与生殖功能的调控,由TAC3编码的NKB被认为是LH的关键调节基因,CYP19则是雌激素生物合成的关键基因。FSH与这些关键激素和基因以直接或间接的方式作用,来调控绵羊卵泡发育过程。本研究以上述关键激素和基因为切入点,探究FSH诱导绵羊排卵效果的差异。本实验以连续多次超数排卵的萨福克羊为研究对象,分为高排卵组和低排卵组,第一利用Elisa法检测高/低排卵组外周血血清中LH、E2、AMH三种激素的动态变化,发现高排卵组中激素LH、E2、AMH的平均浓度均高于低排卵组,其中激素LH浓度显著高于低排卵组,且各激素在高/低排卵组间的分泌规律基本相同;第二利用腹腔内窥镜统计试验羊排卵数+卵泡数目,高/低排卵组中,排卵数+卵泡数目分别为31.17±6.37个、6.67±3.50个,两组间差异极显著(P<0.01);第三利用转录组测序技术对高/低排卵组卵巢组织中的mRNA进行差异分析,筛选出4个主要参与卵泡生长发育的关键基因,2个上调基因FSHR和POMC,2个下调基因TAC3和CYP19;第四通过荧光定量PCR验证发现,FSHR、POMC在高排卵组中的表达量极显著高于低排卵组(P<0.01),CYP19、TAC3在高排卵组中的表达量显著低于低排卵组(P<0.05),高/低排卵组中各基因的表达量与转录组测序结果一致;最后对绵羊卵巢内的颗粒细胞进行体外培养,加入不同浓度外源激素FSH培养24h后收集样品,发现相比于对照组(FSH浓度为0 ng/mL),添加5ng/mL FSH,可促进LH和AMH的分泌,抑制E2的分泌,FSH浓度为10-20ng/mL时,促进E2的分泌,抑制LH和AMH的分泌;同时FSH可促进颗粒细胞中FSHR、POMC的表达,抑制CYP19的表达,TAC3在绵羊颗粒细胞中痕量表达。本实验对FSH诱导绵羊后的激素水平、排卵效果、基因表达等方面进行了研究,并从细胞水平进一步探究了FSH对这些关键激素与基因的调控作用。发现高排卵组中激素LH、E2、AMH分泌量增加,基因FSHR、POMC表达量显著增加,基因TAC3、CYP19的表达量降低,可能是导致高排卵组排卵数显著高于低排卵组的主要原因,并且FSH可促进颗粒细胞中FSHR、POMC的表达,抑制CYP19的表达。探究这些关键激素分泌规律及基因表达特点,能够为解决绵羊超数排卵效果差异的科学问题提供理论依据。
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