第一部分:幽门螺杆菌NapA-CtxB融合蛋白的基因克隆与表达目的:采用基因工程技术克隆、表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒细胞激活蛋白NapA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因NapA-ctxB,为研制H.pylori疫苗提供有效抗原,为探讨NapA致病机理、制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。方法:用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-NapA质粒的NapA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE-nctB,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB;Western blot分析其抗原性。结果:经测序HCTB融合基因片段由807bp组成,编码269个氨基酸残基的多肽。经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为30 000。可溶性表达占全菌的27%以上,经亲和层析后可获得纯度为94%以上的重组蛋白。Western blot分析显示能分别与NpaA抗血清和CT抗血清反应。结论:NapA和ctxB融合基因原核表达质粒构建成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。第二部分:幽门螺杆菌重组NapA-IgY和NapA-CtxB-IgY的制备目的:以重组幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(NapA)和NapA-CtxB为抗原,制备高效价的抗NapA蛋黄抗体(IgY)和抗NCTB蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌治疗、预防性抗体奠定基础。方法:以制备的重组蛋白免疫鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY。ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化。将效价高的NapA-IgY