目的:提取和纯化返魂草的有效部位;制备返魂草温度敏感型眼用原位凝胶,为返魂草的药效学研究及药材的合理开发与利用奠定基础。材料与方法:(1)星点设计-效应面法优化返魂草酚酸部位提取工艺研究:建立HPLC检测方法对原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原酸和咖啡酸进行分析,色谱柱为Agilent 5 TC-C18(250×4.6mm,5μm),柱温25℃,流动相为乙腈(A)-0.4%甲酸水溶液(B),采用梯度洗脱(0~10 min,94%→94%B;10~50 min,96%→86%B),流速1.0 m L·min-1,检测波长280 nm,四种酚酸成分均达到基线分离。采用星点设计-效应面法优化返魂草回流提取工艺。以溶媒比、乙醇浓度、提取时间为自变量,以原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸的收率和浸膏得率的总评“归一值”为因变量,各自变量对总评“归一值”做多元线性回归和二项式拟合,用效应面法选取较佳工艺,并进行预测分析。(2)研究返魂草有效部位的大孔吸附树脂纯化工艺,通过对7种大孔吸附树脂进行静态吸附与解吸实验,优选出合适的大孔吸附树脂。通过动态吸附考察上样液浓度,制备不同浓度梯度上样液,分别上样,完全吸附后洗脱,通过解析率选择最佳上样浓度;对最大上样体积的考察,取上样液上样,收集流出液,绘制泄漏曲线;对水洗除杂水量的考察,上样液完全吸附后,用蒸馏水进行冲洗,绘制水洗脱曲线;对洗脱剂质量分数以及洗脱剂用量进行考察,分别用不同质量分数的乙醇水溶液进行洗脱,收集洗脱液,通过测定洗脱液中4种指标成分的量选择最佳乙醇质量分数,依照确定的条件上样、水洗除杂,用乙醇水溶液洗脱,将流出液进行检测,计算洗脱液中4种指标成分的量,绘制乙醇洗脱曲线,优选最佳洗脱剂体积。(3)对返魂草温敏型眼用原位凝胶的处方进行了优化并考察其体外性质。以泊洛沙姆P407和P188的质量分数作为自变量,以在未经人工泪液稀释和经人工泪液稀释的条件下的胶凝温度为因变量,根据规定的胶凝温度的范围,绘制效应面图,优选返魂草温敏型眼用原位凝胶的处方,并考察该制剂的体外性质。结果:1.模型拟合结果显示二项式拟合优于多元线性回归,确定最佳的提取工艺为:将返魂草药材粉碎至中粉,提取温度设为80℃,提取时间为1.7 h,乙醇浓度为64%,溶媒比为21倍,提取3次。按最佳工艺条件进行验证,得到原儿茶酸549.33μg·g-1,对羟基苯乙酸995.49μg·g-1,绿原酸1965.73μg·g-1,咖啡酸11.38μg·g-1,浸膏得率17.71%。2.通过静态吸附AB-8型大孔树脂对返魂草有效部位的吸附与解吸效果都较好,其最佳上样液的质量浓度为25 mg·m L-1,上样体积为4 BV;上样吸附后,优化的除杂水量为3 BV,用60%乙醇水溶液作为洗脱剂,洗脱体积为4 BV。3.通过多元线性回归和二项式拟合建立因变量与自变量之间的数学模型,二项式拟合的拟合度高、预测性好。根据规定的胶凝温度的范围,通过星点设计-效应面法优选返魂草温敏型眼用原位凝胶的处方。选择P407的质量分数为24%,P188的质量分数为4.5%作为优化处方。该制剂体外性质稳定,并具有良好的缓释作用。结论:1.星点设计-效应面法优化返魂草提取工艺,简便,预测性良好,准确度高。2.大孔吸附树脂对返魂草提取液的纯化效果明显,酚酸部位的含量较提取液有着明显的提高。表明该纯化工艺高效稳定、真实可靠。3.返魂草温敏型眼用原位凝胶符合眼用原位凝胶的要求,体外性质稳定且具有一定的缓释效果,为日后研究返魂草温敏型眼用原位凝胶的安全性评价和药效学奠定基础。