硒是机体必不可少的微量元素,能参与多种酶的生理活动,保护生物膜的结构和功能免受氧化应激损伤。硒缺乏会导致炎症、心脑血管等疾病的发生。食用菌多糖具有抗氧化、增强免疫、预防肿瘤、延缓衰老等多种生物功效,被视为天然药物的重要来源。硒多糖是硒与多糖的有机结合,药理活性较高,易于吸收和利用。本课题对真姬菇（Hypsizygus marmoreus）SK-03菌丝体硒多糖（Mycelia selenium polysaccharides,MSPS）和菌丝体多糖（Mycelia polysaccharides,MPS）的结构进行初步分析,检测了MSPS在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导炎症小鼠模型中的抗氧化和抗炎活性,初探了MSPS发挥器官保护作用的机制,旨在为天然抗炎药物的筛选提供新思路。主要结果如下:（1）确定了真姬菇SK-03菌丝体富硒培养基最适Na₂SeO₃浓度。结果表明,Na₂SeO₃最适添加浓度为3mg/L,此时真姬菇菌丝体的生物量、富硒率及硒含量分别为2.32±0.05g/L、21.62±1.44%和0.28±0.03mg/g。（2）真姬菇MSPS最佳提取参数优化。利用Plackett-Burman（PB）和响应面（Response surface methodology,RSM）试验确定了MSPS最佳提取条件为提取时间3h、乙醇浓度85%、乙醇倍数3倍,此条件下多糖得率为3.19±0.35%。经去色素、去蛋白、DEAE-52凝胶纤维素和葡聚糖凝胶柱层析、透析、冷冻干燥等步骤得到纯化后MSPS,其硒含量为68.79±3.46μg/g。（3）初步分析了MSPS和MPS结构。气相色谱（Gas chromatography,GC）结果表明,MSPS由鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为0.009:1.00:0.20:1.27:2.84:10.49。MPS由鼠李糖、岩藻糖、核糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为0.53:3.93:0.28:0.18:2.23:12.46:6.40。通过高效液相色谱（High performance liquid chromatography,HPLC）分析,MSPS平均数均分子量为3.43×10³Da,MPS为1.17×10³Da。红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR）分析,MSPS和MPS都存在α和β构型,其中MSPS为吡喃糖,MPS为呋喃糖。原子力显微镜（Atom force microscope,AFM）扫描结果显示MSPS分散更均一,粒径更细小。（4）体外抗氧化活性测定。以羟基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率及还原力为指标,测定了MSPS和MPS体外抗氧化能力。结果表明,在0³200mg/L范围内,随着浓度升高,抗氧化能力呈上升趋势,且相同浓度下,MSPS体外抗氧化能力强于MPS。（5）MSPS对炎症小鼠抗氧化、抗炎症及器官保护作用分析。通过腹腔注射LPS（5mg/kg）构建炎症小鼠模型,进行MSPS干预处理。结果表明,高剂量MSPS（800mg/kg）试验组小鼠器官保护效果最好,能显著提高小鼠肺、肝和肾中抗氧化酶超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）酶活性和总抗氧化能力（Total antioxidant capability,T-AOC）;有效抑制各组织中脂质过氧化过程,降低脂质过氧化物（Lipid peroxidation,LPO）和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的积累;血清中谷氨酰转肽酶（Glutamyltranspeptidase,GGT）、补体3（Complement 3,C3）、超敏C反应蛋白（High-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP）、肌酐（Creatinine,CRE）和尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）水平显著下降,血脂紊乱情况得到改善;血清中抗炎性细胞因子白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）水平显著上升,肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）等促炎性细胞因子水平显著下降。细胞CM-H₂DCFDA探针荧光染色,表明MSPS能有效降低肺、肝、肾细胞中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平,进一步说明MSPS有较强的体内抗氧化能力。细胞凋亡分析发现MSPS（800mg/kg）可改善小鼠的细胞凋亡。上述结果表明MSPS具有抗氧化和抗炎症活性,能起到器官保护作用,组织病理学分析进一步验证了该作用。（6）MSPS介导ROS/TLR4/NF-κB信号途径发挥抗氧化、抗炎症及肺脏保护作用的初步分析。腹腔注射LPS（5mg/kg）构建小鼠肺炎模型,高剂量MSPS（800mg/kg）干预后,肺湿干重比（Wet/dry,W/D）和髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）活性显著降低,表明MSPS可减轻炎症反应。免疫印迹法证明MSPS处理后诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达降低,免疫组织化学分析证实MSPS的干预能提高肺组织中抗炎细胞因子IL-10水平。实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qRT-PCR）和免疫印迹法对TLR4（Toll like receptor 4,Toll样受体4）/NF-κB（Nuclear factor-κB,核转录因子）途径中关键基因和蛋白的表达水平进行了分析,发现MSPS能同时在两种水平上下调TLR4的表达。在上述作用共同影响下,MSPS能降低IKKβ（IκB Kinase-β,IκB激酶β）活性,抑制IκB（Inhibitor ofκB,NF-κB抑制蛋白）降解,从而抑制NF-κB的激活,减少下游基因的表达。同时通过免疫组化手段发现NF-κB磷酸化水平降低,证实了NF-κB信号转导途径的激活被抑制。对下游信号分子进行分析,酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）结果表明肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）水平降低,同时MSPS可下调肺组织中IL-1β基因表达及TNF-α蛋白表达量。综上结果表明,MSPS能够通过调控ROS/TLR4/NF-κB信号转导途径发挥抗氧化和抗炎症作用,进而起到器官保护功能。