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本论文以16S rRNA为分子标记,分别以克隆文库法和高通量测序法探讨克拉玛依油田石油污染土壤中细菌群落多样性和系统发育,并分析环境因子与群落分布的关系,为生物处理石油污染物提供理论基础。在克拉玛依油田分别采集离地面5、20、50 cm的石油污染土壤样品,测定环境参数;提取石油污染土壤细菌群落基因组DNA,分别构建三个土层细菌16S rRNA基因文库,利用限制性片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphisms RFLP)技术初步分群,确定各文库中的代表菌株并测定16S rRNA基因序列;利用软件Biodap计算各群落多样性和丰富度指数,以Neighbor-joining法构建三个土层细菌的系统发育树;运用程序CANOCO结合不同样品理化性质的差异进行典型对应分析(CCA),并探讨了土壤理化性质对细菌群落结构的影响。高通量测序法用稀释后的土壤总DNA为模板,利用16S V4区515F和806R做引物,进行PCR扩增,构建文库,利用Hiseq 2500进行上机测序,研究石油污染土壤细菌多样性。环境参数结果表明20 cm土层总磷(TP)、总氮(TN)值最低,50 cm值最高;5 cm土壤里有机碳(TOC)的值最高,50 cm的值最小。基于16S rRNA序列的生物多样性和细菌丰富度值表明20 cm土层生物多样性和丰富度值较高,而50 cm土层各项指数均较低。各土层供试序列RFLP聚类分析表明,克拉玛依油田石油污染土层微生物种群的丰度值较高。Neighbor-joining建立的系统发育结果表明,石油污染土壤被分为5大类,分别为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicute)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、浮霉状菌门(Planctomycetes)。高通量测序法结果表明,三层土壤样品中所含的优势细菌类群大致相同,分别为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)。3个样品的Chao指数和Shannon指数均较大,其中20 cm土样的丰度最高多样性丰富,5 cm土样其次,50 cm土样相对较低。3个土壤样品文库覆盖率都达到99%以上,说明本研究中各样品文库包含了大多数细菌类群,能够充分反映土样中细菌类群分布特征及丰富度。在门分类水平,三层土壤主要菌门是变形菌门(Proteobacteria),属分类水平三层土壤共有的最主要菌属是海杆菌属(Marinobacter)。CCA分析石油污染土壤环境因子与细菌类群之间的关系,分析可得TOC、TP和TN含量是改变细菌类群分布特征的重要因素。克隆文库法与高通量测序法在反映样本中优势细菌类群的结果基本相同,而在反应石油污染土壤微生物群落规模上差异较大。就Shannon指数和Simpon指数反映的结果显示,高通量测序优于克隆文库,即高通量测序比克隆文库更能较客观反映石油污染土层里细菌菌群结构的真实信息。两种方法测试结果表明石油污染土层微生物类群的丰富度指数较高;环境因子是改变石油污染土壤细菌类群空间分布的主要因素。