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目的： RSPOs家族是一类新的Wnt/β-catenin信号激活蛋白，在肿瘤的形成过程中发挥重要作用。我们之前研究已发现RSPO2能够抑制肠癌细胞的转移，而这种抑制作用并非通过经典Wnt/β-catenin信号通路，很可能与非经典Wnt信号通路有关，因此本课题我们将深入研究RSPO2影响肠癌转移的分子机制。 方法： 1. RSPO2蛋白处理肠癌细胞SW480和LOVO并提取膜蛋白和总蛋白，Western blotting检测Fzd7的表达变化，并进一步通过调控Fzd7的表达，检测Fzd7对非经典Wnt信号通路及肠癌细胞迁移功能的影响。 2. RSPO2蛋白处理肠癌细胞SW480和LOVO并提取膜蛋白和总蛋白，Western blotting检测ZNRF3的表达变化，并进一步通过调控ZNRF3的表达，检测RSPO2和ZNRF3对Fzd7的影响。 3.通过免疫共沉淀和免疫荧光实验验证RSPO2与ZNRF3和 Fzd7之间的相互作用。 4.通过Western blotting、报告基因检测、transwell等实验检测RSPO2对Wnt5a介导的非经典Wnt途径的影响。 结果： 1.经RSPO2蛋白处理，SW480和LOVO细胞的膜蛋白和总蛋白中Fzd7表达均明显下调；过表达Fzd7导致PKC和ERK的磷酸化水平显著降低，siRNA干扰抑制Fzd7的表达则出现相反结果。 2.经RSPO2蛋白处理， SW480和LOVO细胞的膜蛋白和总蛋白中ZNRF3表达显著上调；过表达ZNRF3可下调Fzd7的水平并促进其泛素化降解，干扰抑制ZNRF3则出现相反结果；RSPO2能促进Fzd7泛素化降解。 3.免疫共沉淀和免疫荧光实验验证RSPO2与ZNRF3和 Fzd7之间存在相互作用，ZNRF3与Fzd7能相互结合。 4.经Wnt5a蛋白处理，SW480和LOVO细胞中Fzd7表达上调，其下游靶基因ERK和PKC的磷酸化水平也显著上调，siRNA干扰Fzd7后出现相反结果。Transwell实验结果显示RSPO2能抵消Wnt5a对肠癌细胞迁移的促进作用。 结论： 在肠癌细胞中，RSPO2能增加E3连接酶ZNRF3的膜上水平，RSPO2、ZNRF3与Fzd7存在相互作用，促进Fzd7的泛素化降解，进而抑制Wnt5a/ Fzd7介导的非经典信号通路的活性，从而抑制肠癌细胞转移。