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目的：建立适用于膜片钳记录技术的Sprague-Dawley（SD）大鼠Kupffer细胞的急性分离方法，利用膜片钳技术记录并研究SD大鼠Kupffer细胞表面钙池操纵的Ca2+通道的电流(currents of store—operated Ca2+ channels，ISOC)：建立适用于膜片钳技术研究的大鼠肝脏缺血再灌注模型，并分离缺血再灌注后的Kupffer细胞，利用膜片钳技术记录并研究缺血再灌注SD大鼠Kupffer细胞的ISOC。最后观察药物2—APB、SK&96365、econazole和miconazole对缺血再灌注SD大鼠Kupffer细胞的ISOC的影响。方法：以SD大鼠为实验动物，采用Ⅳ型胶原酶原位两步灌注法、差速离心法来获取并分离Kupffer细胞；标准电极内液加入10mmol／L的EGTA和2μmol／L的thapsigargin激活SOC，采用全细胞膜片钳技术记录研究Kupffer细胞ISOC；以断流大鼠肝脏中叶和左叶的门静脉和肝动脉分支20分钟后再恢复血流40分钟的方法，建立适用于膜片钳研究的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型，分离Kupffer细胞进行膜片钳实验；应用快速加药装置将不同浓度的药物2—APB（20μmol／L、40μmol／L、60μmol／L、80μmol／L、100μmol／L）、SK&96365（5μmol／L、10μmol／L、20μmol／L、40μmol／L、50μmol／L）、econazole（0.1μmol／L、0.3μmol／L、1μmol／L、3μmol／L、10μmol／L）、miconazole（0.1μmol／L、0.3μmol／L、1μmol／L、3μmol／L、10μmol／L）加至缺血再灌注大鼠Kupffer细胞周围，记录ISOC，观察药物的影响。结果：新建大鼠Kupffer细胞分离方法获得细胞纯度和成活率可达85％，适用于膜片钳实验。电极内液中加入10mmol／L的EGTA和2μmol／L的thapsigargin激活SOC，利用膜片钳技术可以记录到明显的ISOC，该电流稳定在5分钟内无衰减。保持电位0mv，给于-100mv的指令电压时，正常大鼠Kupffer细胞ISOC的峰值电流为-80.16±23.78pA（n=30）。保持电位0mv，给予-120mv～+80mv，持续时间200ms，阶越为20mv的串联脉冲刺激，频率为0.2Hz，结果显示生理状态下Kupffer细胞ISOC的Ⅰ-Ⅴ曲线近似线性，反转电位约为0mv。采用断流大鼠肝脏中叶和左叶的门静脉和肝动脉20分钟后再开放血流40分钟的方法建立的大鼠缺血再灌注模型，所获得的Kupffer细胞在后期的膜片钳实验中较易形成巨阻封接，较易破膜，适于膜片钳实验。在与正常细胞相同参数的设置情况下，膜片钳记录给予指令电压-100mv时，缺血再灌注Kupffer细胞的ISOC的峰值电流为-159.17±34.89pA（n=30），与对照组Kupffer细胞的ISOC的峰值电流-80.16±23.78pA（n=30）有明显统计学差异（n=30，P＜0.01）；但是ISOCⅠ-Ⅴ曲线的线性关系和反转电位并不改变。观察药物对缺血再灌注大鼠Kupffer细胞的ISOC的影响，发现各浓度2—APB、SK&96365、econazole和miconazole对缺血再灌注大鼠Kupffer细胞的ISOC均有抑制作用，且各浓度药物组与对照组（缺血再灌注组）均有显著统计学意义（n=8，11，13，10，P＜0.01）；各药物对缺血再灌注大鼠Kupffer细胞的ISOC的抑制作用均呈浓度依赖性；EC50分别为37.41μmol／L、5.89μmol／L、0.21μmol／L、0.28μmol／L。结论：本实验成功建立了适用于膜片钳记录技术的SD大鼠Kupffer细胞的分离方法，证实了SD大鼠Kupffer细胞上SOC的存在；成功建立了适用于膜片钳研究的SD大鼠肝脏缺血再灌注模型。缺血再灌注损伤后SD大鼠Kupffer细胞ISOC峰值增大，说明SOC参与了缺血再灌注损伤过程，通过SOC的钙内流可能是肝脏缺血再灌注损伤中钙超载的重要路径；药物2—APB、SK&96365、econazole和miconazole对缺血再灌注SD大鼠Kupffer细胞的ISOC的抑制作用可以抑制Kupffer细胞的活化，减少缺血再灌注过程中对肝组织有损伤作用的活性因子的释放。这为寻找新的在缺血再灌注过程中保护肝组织的药物、解决外科临床的实际困难提供了实验依据。