毛冬青是冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.的根,具有清热解毒,活血通脉,消肿止痛的功效,是治疗冠心病、心绞痛和脉管炎疾病较好的药物。据文献报道,毛冬青主要化学成分为三萜类化合物、苯丙素类化合物、环烯醚萜类化合物、醌类化合物及植物甾醇等。毛冬青的药理作用研究主要集中在毛冬青甲素上,而毛冬青甲素是从毛冬青中提取的毛冬青甙经水解得到毛冬青酸,再经琥珀酸酯化制得的五环三萜化合物钠盐。毛冬青在制剂的提取、纯化工艺多采用水提醇沉或水提醇沉后酸沉碱溶的方法,而对其传统工艺和新工艺的评价研究未见文献报道。毛冬青在《北京市中药饮片标准》推荐的用量为60-120g,基于传统工艺的现有口服制剂难以达到该服用量。本文以提高毛冬青制剂载药量为目的进行设计,建立了毛冬青药材HPLC指纹图谱,并应用于毛冬青制剂过程的评价;优化了毛冬青药材的大孔树脂精制工艺参数,结果表明该工艺可保留HPLC图谱特征峰代表的化学成分、降低固形物得率,毛冬青大孔树脂精制物具有耐缺氧、抗血小板聚集活性;该工艺克服了传统工艺过程化学成分缺失的弊端,达到富集、纯化的目的。主要研究结果如下:1、HPLC指纹图谱的建立采用反相高效液相色谱法,通过对检测波长、流动相、洗脱梯度、柱温和流速的考察,建立了毛冬青药材HPLC指纹图谱的测定方法;对仪器的精密度、样品的稳定性和方法的重复性进行方法学考察;并对市售11批毛冬青药材HPLC指纹图谱进行相似度评价。2、水醇提取工艺研究以吸光度结合HPLC图谱特征峰保留率为指标,对提取溶媒种类和提取次数进行单因素考察;继以吸光度为指标,采用四因素三水平正交实验设计法考察毛冬青提取工艺;再以HPLC图谱特征峰保留率为指标,对所选提取工艺与传统水提工艺进行比较。研究结果表明,毛冬青药材的提取工艺为:取毛冬青粗粉,加70%乙醇6倍量,加热回流2次,每次1小时;以HPLC图谱特征峰平均保留率为指标,毛冬青醇提工艺保留率是水提工艺的1.6倍。3、以HPLC特征峰保留率评价毛冬青传统工艺对毛冬青传统水提醇沉工艺,以HPLC图谱特征峰代表的化学成分保留率和固形物得率为指标,考察了水提醇沉过程中醇沉浓度的影响。结果表明,醇沉浓度在70—80%为宜。对中药部颁标准毛冬青注射剂的提取、纯化工艺,以HPLC图谱特征峰代表的化学成分保留率和固形物得率为指标,考察了毛冬青水提醇沉、酸沉、碱溶工艺步骤保留率。结果表明,酸沉工艺致HPLC图谱中以低极性和中极性特征峰代表的化学成分损失较大,尤其极性较低的峰7代表的化学成分在酸沉过程完全损失;碱溶对HPLC特征峰代表的化学成分基本无影响;4、毛冬青药材的大孔吸附树脂精制工艺研究以吸光度结合HPLC图谱特征峰保留率为指标,考察了毛冬青乙醇提取液在AB-8型大孔吸附树脂的动态吸附及洗脱过程,确定最大上样量以及洗脱溶媒种类和用量。结果表明,最大上样量(以6%泄漏点计)以毛冬青生药量计为480mg/g干树脂;洗脱溶媒种类及用量为70%乙醇洗脱4倍柱体积。该工艺的验证实验表明,上柱液与醇洗液HPLC图谱基本一致,特征峰平均保留率达到90%;上柱液与醇洗液TLC图谱特征斑点基本一致;该工艺保留了上柱液HPLC图谱和TLC图谱所代表的化学成分,固形物得率由过柱前的14%降低到过柱后的8%。5、毛冬青大孔树脂精制物初步药效学实验开展了体外抗血小板聚集和异丙肾上腺素增加小鼠耗氧量的初步药效学实验,结果表明毛冬青大孔树脂精制物具有抗血小板聚集和耐缺氧活性。6、毛冬青醇洗液浓缩、干燥工艺研究以HPLC图谱特征峰保留率为指标,考察了受热温度和受热时间对毛冬青醇洗液浓缩干燥过程的影响。结果表明,受热温度和受热时间对HPLC图谱中峰5(28min)、峰6(30min)和峰7(47min)代表的化学成分稳定性影响显著,尤以100℃受热6h降解最为显著,HPLC图谱中峰5、峰6、峰7平均保留率仅为3%。提示短时间、较低温度的受热状态有利于毛冬青醇洗液浓缩、干燥过程中化学成分的保留;毛冬青浓缩干燥工艺宜采用降温缩时的工艺技术,如减压浓缩、真空干燥等。