扁平苔藓(lichen planus,LP)是伴有慢性浅表性炎症的角化异常性皮肤-黏膜疾病之一,病因至今不明,可单独或同时发生在皮肤、黏膜和指(趾)甲。发生在口腔的病损即为口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP),是口腔黏膜病中常见疾病,仅次于复发性口腔溃疡,患病率约为0.51%,中年女性好发。基本特点是口腔黏膜左右对称的出现珠光灰白色条纹,可交织成网状或树枝状,条纹基底黏膜充血,重则糜烂,病程长,易复发。OLP病因复杂,临床分型尚无统一标准,Seoane等根据OLP不同的生物学行为将其分为糜烂型和非糜烂型,糜烂型病损较非糜烂型易发生恶变,但其致癌机制至今不详。口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔颌面部最为常见的恶性肿瘤,约占口腔恶性肿瘤的90%,其导致的的死亡率居口腔癌之首,危害极大。多发生于40~60岁的成人,以舌、颊、牙龈、腭、上颌窦最为常见,主要表现为无痛性的肿块、硬结或溃疡,继发感染或侵犯神经,可出现疼痛。世界卫生组织(WHO,2005)根据肿瘤的恶性程度、细胞和细胞核的多形性以及细胞分裂活性等将OSCC分为高、中、低分化三级。临床上部分口腔扁平苔藓可转变为OSCC,特别是糜烂型OLP其癌变风险更大,且病损持续时间越长,恶变的可能性就越高。1910年,Hallopean首次报道OLP癌变病例,此后国内外相继研究表明OLP具有癌变倾向。口腔扁平苔藓癌变的发生发展经历着一个“正常口腔黏膜上皮细胞→癌前病变→异常增生→OSCC”的动态过程,是多阶段、多基因、多因素条件共同作用的结果,其病因和发病机制尚不清楚。热休克蛋白(heat shock protein,HSP)又称应激蛋白,是广泛存在于生物界具有高度保守性质的一组蛋白质,遗传学家Ritossa在1962年研究果蝇唾液腺时首次发现。现应用最多的是森本划分方法,将HSP主要分为HSP90、HSP70、HSP60、小分子量HSP(sHSP)4个家族。热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)是sHSP家族中成员之一,在生理状态下表达水平较低,参与调控细胞增殖、分化等生理过程,当机体受到外界环境刺激时,主要通过促进不可逆损伤的蛋白质水解来发挥保护细胞的作用,也可通过抑制变性蛋白质聚集和细胞凋亡来实现。现研究报道,在许多恶性肿瘤组织中,如肝癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌等hsp27的表达都增高。虽hsp27与多种恶性肿瘤的发生发展有一定联系,但关于hsp27在口腔扁平苔藓及其癌变中的表达及相关关系尚未有研究。目的:本实验通过免疫组织化学技术,观察hsp27在口腔扁平苔藓病损组织和口腔鳞状细胞癌(均由口腔扁平苔藓癌变而来)病损组织中的表达水平,探讨hsp27在口腔扁平苔藓及其癌变发生发展过程中表达水平的变化,为临床上诊断及治疗口腔扁平苔藓及其癌变提供新的方法。方法:搜集口腔扁平苔藓组织蜡块32例,均经河北医科大学第二医院临床和病理科提供。其中无上皮异常增生18例,伴有上皮异常增生14例。以上病例在取活检前3个月内均未使用任何免疫抑制剂类药物和皮质类固醇激素等。口腔鳞状细胞癌组织蜡块(均由口腔扁平苔藓癌变而来)8例。所有患者在术前均未接受放化疗及免疫治疗,且术后病理证实为鳞状细胞癌。另取15例行牙冠延长术、拔出埋伏阻生智齿、口腔颌面部外伤清创缝合术过程中需切除的正常黏膜组织作为对照组。标本均经4%多聚甲醛固定24小时,制备5μm厚切片,石蜡包埋备用。采用免疫组化sp法对hsp27进行免疫组化染色。以已知的hsp27阳性标本作为阳性对照,以磷酸盐缓冲液(pbs)代替一抗作为阴性对照。hsp27免疫组化染色阳性为胞浆或胞膜出现黄色或棕黄色染色,无棕黄色染色为阴性表达。采用图像分析系统进行图像分析。免疫组化结果采用半定量积分法(积分=染色强度×染色细胞比例)判定。记录两种因子的染色强度和阳性细胞百分比的评分,将两项得分相乘得出最终结果。按照最后得分分为以下四个等级:0分为阴性(-),1~3分为弱阳性(+),4~8分为中度阳性,≥9分为强阳性(+++)。所得数据用spss13.0统计软件包进行统计学分析,免疫组化单因素研究实验结果采用χ2检验,组间比较采用等级资料秩和检验。检验水准α取0.05,p<0.05为差异有统计学意义。结果:1hsp27在正常黏膜组中的染色结果正常口腔黏膜hsp27阳性表达比较低,主要以细胞浆为主。15例正常口腔黏膜中仅3例呈弱阳性表达,阳性表达率为20.0%。2hsp27在口腔扁平苔藓组中的染色结果在口腔扁平苔藓伴有或不伴有上皮异常增生的组织中,hsp27表达的部位不同。在口腔扁平苔藓不伴有上皮异常增生组织中,hsp27阳性表达主要位于基底层细胞和棘层细胞,颗粒层零星出现阳性表达,棘层细胞出现强阳性表达,固有层浸润淋巴细胞内偶尔可见弱阳性表达。18例olp无上皮异常增生组织中12例出现阳性表达,其阳性表达率为66.67%,阳性表达高于正常口腔黏膜组。与正常口腔黏膜组相比,有统计学意义(p<0.05)。在口腔扁平苔藓伴上皮异常增生组织中,hsp27在上皮固有层可见阳性表达,基底层细胞中出现强阳性表达。14例olp伴有上皮异常增生组织中有11例出现不同程度阳性表达,阳性表达率为78.57%。与正常黏膜组相比有统计学意义(p<0.05),但与olp无上皮异常增生组织组相比较无统计学意义(p>0.05)。3hsp27在口腔鳞状细胞癌中的表达在口腔鳞状细胞癌组织中,hsp27的表达主要位于癌细胞,癌巢中央成强阳性表达,周边区癌细胞弱阳性表达。8例oscc病损组织中有5例出现强阳性表达,阳性表达率为87.50%,明显高于前三组。与正常口腔黏膜组和olp无上皮异常增生组织组相比有统计学意义(p<0.05),与olp伴有上皮异常增生组织相比较无统计学意义(p>0.05)。至于hsp27在oscc分型中的表达本实验尚未做相关研究。实验数据经统计学分析,四组之间相比用χ2检验得出χ2值为29.966,p值为0.001(p<005)为差异有统计学意义;年龄、性别之间相比差异均无统计学意义(p>0.05)。结论:1hsp27在正常口腔黏膜组织、口腔扁平苔藓无上皮异常增生组织、口腔扁平苔藓伴上皮异常增生组织、口腔鳞状细胞癌组织中均有表达,阳性表达率分别为20.0%、66.67%、78.57%、87.5%,阳性表达率依次增高,呈递增趋势。2 HSP27在口腔扁平苔藓及其癌变组织中的高表达提示其在口腔扁平苔藓癌变过程中可能具有一定的意义。