稻瘟病是影响水稻生产的三大水稻病害之一,利用抗病基因对病害进行控制已经成为最主要且最经济环保的解决途径。因此,挖掘并利用新的抗病基因对水稻育种至关重要。前期本研究室在水稻骨干品种粤晶丝苗2号的8号染色体上定位了稻瘟病隐性抗病基因pi55。为了对pi55进行克隆以及功能验证,本研究开展以下几方面的工作,获得的主要结果如下:1、pi55的精细定位及物理图谱的构建在前期的研究中,已经将pi55界定在标记H2^H66之间1.9 cM的遗传区域内,二者间的物理距离约为152 kb。为了对其进行精细定位,本研究在此区域内开发了一系列分子标记,并进行连锁分析,最终将pi55定位于L11-10^Y12之间约20 kb区域。将与目的基因紧密连锁的分子标记锚定在参考品种日本晴和Zhenshan 97上,构建了pi55的电子物理图谱。2、候选基因的预测及序列分析利用基因预测软件对参考品种日本晴及ZS97进行候选基因的预测。结果表明,在目标区域内共有5个候选基因分别为pi55-1、pi55-2、pi55-3、pi55-4、pi55-5。随后对抗病亲本R9-1及感病亲本Q2326进行了基于PCR片段的重叠测序,序列比对的结果表明候选基因pi55-4、pi55-5具有抗、感一致性差异。3、pi55候选基因的克隆及遗传转化为了全面地对候选基因进行功能验证,将5个候选基因克隆,并以感病品种Q2443为受体进行功能获得性验证。同时利用RNAi技术,对2个最佳候选基因pi55-4、pi55-5进行功能丧失性验证。通过上述遗传转化,目前获得了一批功能获得性的T₀代转化苗。后续工作正在推进中。