论文部分内容阅读
目的：1.探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BAFF)水平与SLE活动的相关性。
2.探讨青蒿琥酯(ART)对MRL/lpr狼疮鼠的疗效及作用机制
方法：实验一：50例SLE患者(活动期25例，稳定期25例)，15例健康志愿者为对照，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清BAFF水平。直线相关分析血清BAFF水平与狼疮活动指标的相关性，比较治疗前后血清BAFF水平的变化。
实验二：MRL/lpr鼠随机分为ART治疗组、环磷酰胺(CTX)治疗组和对照组。16周龄时ART组给予ART125mg·kg-1d-1治疗16周，CTX组给予CTX100mg·kgx2d腹腔注射。考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量，间接免疫荧光法检测血清抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体滴度，PAS染色观察病理改变，免疫荧光检测补体C3沉积，反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠脾脏B细胞刺激因子(BAFF)mRNA的表达水平、肾脏血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平，用免疫组织化学的方法检测小鼠肾脏中VEGF的蛋白表达。
实验三：MRL/lpr鼠随机分为ART治疗组、硫酸羟氯喹(HCQ)治疗组和对照组。18周龄时ART组给予ART50 mg·kg-1d-1、HCQ组给予HCQ150mg·kg-1d-1治疗14周。考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量，酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(ds-DNA)抗体水平，观察肾脏、肺脏、颌下腺病理改变，流式细胞术检测脾脏和淋巴结中CD4+ Foxp3+T细胞百分率。ELISA法测血清、尿液的MCP-1水平。免疫组织化学的方法检测小鼠肾脏中PDGF、MMP-2、HMGB-1的表达。Western bolting(WB)法检测肾组织内MCP-1、Foxp3、MMP-2、MMP-9、HMGB-1的表达。
结果：实验一：活动期SLE患者血清BAFF水平(8.234±1.64)ng/ml显著高于稳定期水平(3.22±0.63)ng/ml(P<0.01)和正常水平(1.494±0.22)ng/ml(P<0.01)。稳定期SLE患者血清BAFF水平也显著高于正常水平(P<0.05)。16例SLE患者治疗前血清BAFF水平(9.27±2.29)ng/ml显著高于治疗后水平(4.40±0.76)ng/ml(P<0.05)。SLE患者血清BAFF水平与抗ds-DNh抗体(r=0.58，P<0.05)、SLE疾病活动评分(SLEDAI)(r=0.326，P<0.05)、24h尿蛋白(r=0.412，P<0.05)显著正相关。
实验二：①24、28、32周24h尿蛋白定量ART组(4.91±1.17mg，5.25±1.01mg，6.37±1.19mg)显著低于对照组(8.98±1.32mg，9.30±0.63mg，10.02±1.61mg)(均P<0.01)，28、32周24h尿蛋白定量ART组显著低于CTX组(5.25±1.01mg vs7.74±1.05mg，6.37±1.19mgvs9.56±1.91mg)(均P<0.05)。②32周龄时体重ART组(36.33±5.48g)高于对照组(32.80±3.00g)(P<0.05)，血清肌酐ART组(15.9±2.4μmol/L)显著低于对照组(20.8±5.1μmol/L)(P<0.05)。③ART组和CTX组肾脏病理损伤较对照组减轻，肾脏内补体C3沉积较对照组减少。④ART组脾脏BAFF mRNA表达(0.81±0.05)和CTX组脾脏BAFF mRNA表达(0.74±0.13)均低于对照组(0.98±0.07)(P<0.05)。⑤ART组肾脏VEGF mRNA表达(0.72±0.11)和CTX组肾脏VEGF mRNA表达(0.66±0.19)均低于对照组(0.92±0.06)(P<0.05)。⑥免疫组化示ART组和CTX组肾脏VEGF表达比对照组减轻。
实验三：①24h尿蛋白定量28周时HCQ组(2.52±1.98mg)和ART组(2.40±2.01mg)低于对照组(4.80±3.20mg)(P<0.05)，30周时HCQ组(2.84±1.10mg)和ART组(2.44±1.87mg)显著低于对照组(6.35±1.89mg)(P<0.01)。②32周龄时ART组体重(39.12±6.12g)显著高于对照组(37.12±0.98g)(P<0.05)，血清肌酐(7.33±4.37μmol/L)低于对照组(12.5±2.26μmol/L)(P<0.05)，血清抗ds-DNA抗体水平显著低于对照组。③HCQ组和ART组肾脏病理损伤较对照组减轻。④HCQ组(2.30％±0.69％)和ART组(2.15％±0.53％)脾脏中CD4+Foxp3+T细胞百分率均显著高于对照组(1.46％±0.51％)(P<0.05)，HCQ组(0.68％±0.33％)和ART组(0.97％±0.28％)淋巴结中CD4+Foxp3+T细胞百分率均显著低于对照组(2.15％±0.72％)(P<0.01)。⑤ART组肾脏内MCP-1、MMP-2、MMP-9、HMGB-1的表达均低于对照组。⑥30周时血清MCP-1水平ART组(1072.37±242.43)pg/ml和HCQ组(1103.02±185.56)pg/ml均显著低于对照组(1490.67±329.43)pg/ml(P<0.05)，尿液中MCP-1水平ART组(198.79±113.47)pg/ml和HCQ组(189.16±70.85)pg/ml均显著低于对照组(446.79±192.31)pg/ml(P<0.05)。
结论：实验一：SLE患者血清BAFF水平显著升高，和疾病活动指标显著正相关，提示BAFF参与了SLE发病，血清BAFF水平可作为SLE活动的指标。阻断BAFF治疗SLE有效。
实验二：青蒿琥酯治疗MRL/lpr狼疮有效，可以改善肾脏病理损伤，降低尿蛋白，延长狼疮鼠生存期，抑制BAFF的产生、抑制肾组织C3的沉积及VEGF的产生，可能是青蒿琥酯治疗MRL/lpr有效的机制之一。
实验三：ART和HCQ均能上调脾脏中的CD4+Foxp3+T细胞百分比，降低血液和肾脏中MCP-1水平。