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甲基对硫磷水解酶可生物降解有机磷农药，由于其特殊的应用价值，越来越受到人们的关注。本文的研究对象为来源于苍白杆菌的甲基对硫磷水解酶MPH-Och，其在毕赤酵母系统中不能有效地分泌表达。本论文通过提高MPH的热稳定性和酸稳定性，以提高其在毕赤酵母的分泌表达效率。 将热稳定性突变体MPH-G194P和MPH-S274Q在毕赤酵母中表达，经过120 h摇瓶诱导培养发现，突变体MPH-S274Q的培养基上清的酶活力达0.7 U/mL，蛋白分泌量是野生型的14倍，SDS-PAGE电泳图中培养上清有明显的蛋白条带，进一步证明了分泌效率的提高。通过 RT-PCR分析可知，热稳定性突变体MPH-S274Q的mph转录量是野生型MPH的2.1倍，hac1和kar2转录量分别比MPH高2.4和0.4倍，这在一定程度揭示了MPH-S274Q更易分泌的原因是S274Q的突变促发内质网合成了更多的蛋白质折叠因子，使MPH能够更有效地合成并分泌。 由于毕赤酵母诱导培养基BMMY的pH值与MPH的最适pH不一致，所以通过改变 MPH表面氨基酸的极性，构建了酸稳定性突变体 MPH-K208E、MPH-K277D和双点突变体MPH-S274QK277D，使其在pH=5.0~6.0的稳定性大大提高，结果显示，突变体MPH-K277D的蛋白分泌量是野生型的14.8倍，经SDS-PAGE分析可知，蛋白的分泌量明显提高，MPH-K277D的RT-PCR结果与突变体MPH-S274Q类似。 通过提高MPH的热稳定性和酸稳定性，提升了其在毕赤酵母的分泌效率，该方法为其他外源蛋白在毕赤酵母分泌表达提供了新思路。 甲基对硫磷水解酶与eGFP融合表达成功，为下一步突变体探索毕赤酵母分泌机制的细胞定位提供了实验基础。