人生长激素(hGH)是一种单链多肽激素,它由191个氨基酸组成,主要经人脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌.人生长激素具有广泛的生理功能,在生物制药领域具有十分重要的地位.将酿酒酵母作为基因运送载体,研究和探索经消化道途径基因治疗具有重要的理论意义.消化道基因治疗具有方便、安全等特点,市场前景巨大.该研究主要进行人生长激素在酿酒酵母中的克隆以及该重组酵母消化道转基因过程的研究.首先利用ECHO克隆系统,构建两种以酿酒酵母为宿主菌的附加型重组质粒,即pYES-hGH酿酒酵母表达载体和pESC-CMV-hGH酵母-哺乳动物穿梭载体.通过酶切鉴定、菌落PCR分析,对重组载体上的外源基因片段进行测序并分析,证明人生长激素基因及相关序列已经成功克隆到表达载体.采用常规醋酸锂转化法把重组表达载体转化到酿酒酵母中,利用营养缺陷型选择培养基及菌落PCR法筛选重组转化子.对重组酵母进行特性研究,发现重组酵母的质粒稳定性很高,其生长曲线呈典型的反S型生长,且两种重组酵母的生长规律相差不大.携带pYES-hGH酿酒酵母表达载体的重组酵母经不同时间的诱导表达,机械破壁后进行SDS-PAGE电泳分析,发现16小时的诱导时间可产生最大的hGH表达量.把16小时诱导表达产物经Western blot分析,证明表达产物确为人生长激素.把构建的两种重组酵母(携带酿酒酵母表达质粒的重组酵母和携带酵母-哺乳动物穿梭质粒的重组酵母)细胞通过小鼠灌胃进行免疫实验,检测免疫小鼠体内血清中的hGH抗体.利用酿酒酵母诱导表达的hGH蛋白作为抗原,经ELISA分析发现,小鼠血清中确实有hGH抗体的产生,初步说明hGH基因经酿酒酵母的携带,已通过消化道途径进入小鼠的体内.