论文部分内容阅读
目的：慢性肾脏病(CKD)是危害全世界公共卫生健康的重大疾病。CKD患者普遍存在活性维生素D不足或缺乏。活性维生素D不仅通过调节肾脏、骨、甲状旁腺功能,维持钙磷及骨代谢平衡,还有独立于钙磷代谢调节的肾脏保护作用。临床和实验研究发现,短期补充活性维生素D(1,25(OH)2D3)可保护足细胞,减轻蛋白尿,延缓肾衰竭进展,但其长期作用尚未明确。本研究采用5/6肾切除方法制备慢性肾衰竭模型大鼠,观察长期(24w)给予1,25(OH)2D3对大鼠蛋白尿、肾功能及足细胞结构与功能的影响方法：12只体重在180-200g的雄性Sprague-Dawley大鼠,经5/6肾切除手术制备慢性肾衰竭模型。随机分为慢性肾衰竭模型组(D组,n=6)、慢性肾衰竭+1,25(OH)2D3组(C组,n=6),同时制备假手术组,仅剥离肾包膜(N组,n=6)。C组手术3w后开始给予1,25(OH)2D3,3ng/100g/d,腹腔注射,共24w。于术后3、12、24w取血清并留取24小时尿,检测三组大鼠血清肌酐(SCr),尿蛋白(UP)、尿肌酐(UCr)。24w处死大鼠,取肾组织,行常规病理和电镜检查,观察肾组织和足细胞超微结构改变。免疫组化法检测肾小球维生素D受体(VDR)、podocalyxin、β-catenin及Snail表达水平改变,并分析其与蛋白尿、肾功能改变的关系。结果：(1)3w-24w,C组、D组SCr及UP较N组明显增高(均p<0.05)。24w时,与D组比较,C组SCr明显降低、UP明显减少,差异均有统计学意义(均p<0.05)。3w-24w, C组、D组肌酐清除率(Ccr)均明显低于N组,差异有统计学意义(p<0.05),而前两者之间差异无统计学意义(p>0.05)。3w-24w,三组大鼠血清钙、磷水平比较均无显著差异(均p>0.05)。(2)病理检查显示,与N组比较,C组、D组大鼠肾小球硬化指数明显增加(p<0.05),但C组较D组明显减轻(p<0.05)。电镜检查发现,C组较D组足细胞超微结构损害明显减轻。免疫组化法证实,N组大鼠VDR表达方式与podocalyxin相似,主要表达于足细胞,肾小球无明显β-catenin、Snail表达。在D、C组,肾小球podocalyxin、VDR表达明显减少(均p<0.05),P-catenin、Snail表达明显增加(均p<0.05),仍主要位于足细胞。与D组比较,C组大鼠肾小球足细胞podocalyxin、VDR表达上调(均p<0.05),β-catenin、Snail表达明显下调(均p<0.05)。相关分析表明,VDR表达与足细胞podocalyxin呈正相关,VDR表达与蛋白尿、SCr呈负相关；足细胞β-catenin表达与蛋白尿、SCr呈正相关。结论：1、长期(24w)给予活性维生素D可以使慢性肾衰竭大鼠尿蛋白水平明显减少、血肌酐水平明显降低、肾小球硬化程度明显减轻,对肾脏具有一定保护作用。2、长期(24w)活性维生素D干预可以明显抑制慢性肾衰竭所致大鼠足细胞podocalyxin及VDR表达水平的下调。3、长期(24w)活性维生素D干预可以明显抑制慢性肾衰竭大鼠足细胞Wnt/β-catenin-snail信号通路激活,下调足细胞β-catenin及snail表达水平。这可能是活性维生素D保护足细胞、减轻蛋白尿、延缓慢性肾脏病进展的重要机制。