前言 氨基糖甙类抗生素是临床常用广谱杀菌剂,广泛应用于结核及革兰氏阴性菌感染疾病的治疗,但其对耳蜗、前庭,肾脏等器官有明显的毒性作用,这也限制了氨基糖甙类抗生素在临床上的应用。近来有研究表明氨基糖甙类抗生素可在耳蜗诱导毛细胞加速凋亡,而细胞凋亡的发生与Caspase家族成员的活化有直接关系。本实验通过检测Caspase-3在庆大霉素所致豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时的表达,探讨氨基糖甙类抗生素所致耳蜗外毛细胞的损伤特点及耳毒性的机制。 材料与方法 材料:耳廓反射灵敏健康豚鼠30只,体重250～350g。随机分成3组,每组10只。实验1组:庆大霉素200mg·kg^-1·d^-1,腹腔注射,连续6天;实验2组:庆大霉素200mg·kg^-1·d^-1加速尿80mg·kg^-1·d^-1,腹腔注射,连续6天;对照组:生理盐水200mg·kg^-1·d^-1,腹腔注射,连续6天。第7天处死豚鼠。 方法:（1）DPOAE记录方法:隔音室内,豚鼠麻醉状态下进行双耳DPOAE检测。,选择初始纯音f₁与f₂,f₂/f₁=1.22,强度差L₁-L₂=10dBSPL,取DPOAE幅值超过本底噪音3dB为DPOAE检出标准,测试频率f₀=（f₁×f₂）^1/2为1、2、4、6、8kHz处的幅值。（2）耳蜗毛细胞铺片及冰冻切片标本制备:各组豚鼠于全身麻醉状态下行第二次DPOAE检测后,开胸,4℃生理盐水经心脏灌流,冲出全部红细胞后4%多聚甲醛溶液灌注固定。快速断头处死,取左侧听泡并开放卵圆窗和圆窗,蜗尖打孔灌注新鲜配制的0.5%硝酸银溶液2～3ml,用4%多聚甲醛溶液灌注并固定于该溶液中,自然光下曝