论文部分内容阅读
目的:探讨小剂量三氧化二砷（Arsenic trioxide,As2O3）联合3′-叠氮-3′-脱氧胸腺嘧啶核苷（3′-azido-3′-deoxythymidine,AZT）对人肝癌Hep G2细胞自噬的影响及可能的作用机制。方法:分别用As2O3（2μmol/L）、AZT（20μmol/L）及两药联合处理人肝癌Hep G2细胞,同时以未经任何药物处理的人肝癌HepG2细胞作为空白对照组,药物作用24h后,透射电镜法观察对照组及联合用药组人肝癌Hep G2细胞的自噬体及自噬溶酶体的形成情况;吖啶橙染色法观察各组人肝癌Hep G2细胞中酸性囊泡和自噬溶酶体的堆积情况;荧光定量PCR法检测各组人肝癌HepG2细胞的Beclin1、Lc3和P62 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测各组人肝癌Hep G2细胞BECLIN1、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白的表达。结果:透射电镜显示:在联合用药组观察到数量较多的自噬体;吖啶橙染色法显示:联合用药组酸性囊泡及自噬溶酶体的数量多于对照组及各单药组（P<0.01）;荧光定量PCR法显示:联合用药组Hep G2细胞的Beclin1、Lc3 mRNA表达高于对照组及各单药组（P<0.01）,P62 mRNA表达低于对照组及各单药组（P<0.01）;蛋白质印迹法显示:联合用药组HepG2细胞的BECLIN1、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量高于对照组及各单药组（P<0.01）,P62蛋白表达低于对照组及各单药组（P<0.01）。结论:As2O3（2μM）联合AZT（20μM）具有促进人肝癌Hep G2细胞自噬的作用,且其促进作用明显强于各单药组,可能与二者联合导致Beclin1的表达上调有关。