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本试验对两株流感病毒Sw/FJ/1/01(FJ01)与DK/ZJ/52/00(ZJ00)进行了研究。FJ01能感染小鼠并致小鼠死亡,ZJ00不能感染小鼠。测序发现它们有23个氨基酸不同。为了研究FJ01与ZJ00的跨种传播机制,本实验建立了ZJ00和FJ01的反向遗传操作系统。分别以两病毒为背景,用反向遗传技术,在293T细胞上救获了16个单基因替换重组病毒。将救获的16个病毒以106EID50剂量滴鼻感染小鼠。用ZJ00的PA和M基因替换FJ01相对应的基因,结果使得RFJ01在小鼠肺脏感染能力降低了104.21倍。反之若用FJ01的PA和M基因来替换ZJ00相对应的基因,结果使得R ZJ00由不感染小鼠肺脏变为感染。其它单基因替换的重组病毒对小鼠感染能力没有变化。结果证明M基因和PA基因影响病毒FJ01与ZJ00在小鼠肺脏中的复制。为了明确PA和M基因是否同时影响了病毒FJ01和ZJ00对小鼠致病力,我们把M和PA基因同时替换,结果发现,以ZJ00的PA基因和M基因一起替换FJ01的PA基因和M基因,结果使得病毒RFJ01/ZJ00PA+M在小鼠肺脏不复制;反之,以FJ01的PA基因和M基因一起替换ZJ00的PA基因和M基因,结果使得RZJ00/FJ01PA+M能感染小鼠,在肺脏的病毒滴度达到了2.5LgEID50。试验证明FJ01和ZJ00对小鼠感染能力是由M和PA基因共同影响的。为了更深入的研究两毒株的致病机理,我们分析了FJ01和ZJ00的PA和M基因的氨基酸序列,结果发现M2基因有1个氨基酸不同,PA基因有4个氨基酸不同。为了确定在感染小鼠时,具体是PA的哪一个氨基酸起作用,我们对PA的两个位点进行点突变,救获4个突变病毒。突变病毒对小鼠的感染结果发现:PA的54位氨基酸由I变为V后,可使得RFJ01在小鼠肺脏中复制能力降低10000倍。反之,PA的54位氨基酸由V变为I后,可使得RZJ00对小鼠由不感染变为了感染。PA的330位氨基酸的改变并没有影响病毒致病性。结果证明PA基因的54位氨基酸影响着FJ01和ZJ00对小鼠感染能力。本实验利用反向遗传操作技术和定点突变技术,发现M2基因的26位氨基酸和PA基因的54位氨基酸共同影响了FJ01和ZJ00对小鼠感染能力。