抗新城疫病毒中药筛选及其复方的动物试验

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lanrengbuluo
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【目的】中药在防治病毒性疾病方面具有广阔的发展前景,为进一步研制抗新城疫病毒中药复方,本研究通过体外建立新城疫病毒(NDV)细胞培养模型,筛选有效的抗NDV单味中药以及最佳中药复方,以22日龄雏鸡新城疫(ND)感染模型评价中药复方的安全性和临床疗效,为开发抗NDV中药提供科学依据。【方法】(1)NDV在BHK-21、HeLa、DF-1细胞上盲传,通过细胞病变(CPE)观察法、血凝试验(HA)和分子生物学方法鉴定,评价NDV对不同细胞的易感性,确定NDV感染的最佳细胞模型。(2)采用传统的水煎法提取中药有效成分,通过中药与NDV的直接作用、预防和治疗三种实验模式探讨不同中药体外对NDV的抑制作用,以治疗指数(TI)为标准评判药效。(3)依据中药的配伍原则自拟4组中药复方,通过上述方法进一步筛选最佳抗NDV中药复方。(4)通过雏鸡毒性实验,确定中药复方在雏鸡体内的用药剂量范围,以22日龄雏鸡感染NDV,构建ND动物模型,通过预防和治疗实验探讨中药复方的疗效。【结果】(1)NDV感染DF-1、BHK-21引起的CPE以发生细胞融合和形成合胞体为主要特征,感染HeLa形成的合胞体较小,以细胞变圆、回缩、脱离瓶壁为主要特征,但在DF-1上的增殖速度较快,盲传至第4代即稳定,HA效价为1:16;对NDV鸡胚毒株及细胞毒株分子生物学方法鉴定表明,实验毒株符合NDV强毒株的特征。(2)中药与NDV的直接作用表明,黄芪、柴胡、野菊花、白头翁、马鞭草、细辛、金银花、黄芩、细辛对NDV的直接灭活作用较强,治疗指数分别为64、16、32、32、64、64、32、32、64;预防作用表明,黄芪、白头翁、金银花、野菊花、藿香、细辛、生地榆抗NDV吸附作用较强,治疗指数分别为16、64、64、16、32、16、16;治疗作用表明,黄芪、金银花、野菊花、马鞭草、川芎、柴胡、藿香、细辛抑制NDV复制作用较强,治疗指数分别为32、16、16、16、16、8、8、8;综合中药与NDV的三种作用方式,黄芪、柴胡、白头翁、野菊花、金银花、黄芩、藿香、细辛、生地榆、川芎和马鞭草抗NDV作用较强。(3)对黄芪、野菊花、柴胡、黄芩、金银花、生地榆、藿香7种中药依据中药配伍原则自拟4组中药复方,三种作用方式显示以黄芪、白术为主要组分的复方4抗NDV作用最好,其直接作用、预防和治疗三种作用方式的TI分别为16、64、32,对细胞的平均保护率分别为34.29%、37.86%、56.71%。(4)中药复方在雏鸡体内的用药剂量范围为0.5~2g/mL;NDV在雏鸡体内的LD50为10-2.76;中药预防和治疗疗效表明该复方可降低雏鸡死亡率,且与浓度呈正相关,但预防效果远远优于治疗效果,预防作用高、中、低剂量组对雏鸡的死亡保护率分别为70%、40%、10%,而治疗效果对雏鸡的死亡保护率分别为30%、20%、20%,病毒唑对照组预防和治疗效果对雏鸡的死亡保护率分别为10%、30%。【结论】(1)通过体外增殖NDV,证实DF-1细胞为NDV感染的最佳细胞模型。(2)在中药与NDV直接灭活、预防和治疗三种作用方式下,筛选出11种具有较强抗NDV作用的单味药,即黄芪、柴胡、白头翁、野菊花、金银花、黄芩、藿香、细辛、生地榆、川芎和马鞭草。(3)通过中药相互配伍,确定最佳抗NDV中药组份为黄芪、白术等。(4)通过雏鸡ND人工感染模型的预防和治疗实验,证实中药复方芪术扶正汤对ND有较强的预防效果,可显著降低死亡率,并能延长雏鸡存活时间。
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