蛹虫草为我国传统名贵中药,具有重要的药用价值,常被用作冬虫夏草的替代品,目前,蛹虫草已实现大规模人工培育,进一步加速了对蛹虫草的药用价值及活性成分的研究。虫草素作为蛹虫草中主要活性成分之一,具有抗病毒、抗肿瘤等多种重要的生物活性,但当前虫草素的生产量根本无法满足市场的需求,主要受到几个关键因素的限制,首先,虫草素在蛹虫草或其他虫草属真菌中的含量极低,富集难度大；第二,目前没有能实现大规模分离纯化虫草素的技术研究；再者,不具备高纯度虫草素的大量制备技术。因此,本研究着眼于上述三个问题,对虫草素高效富集关键技术进行了系统的研究。1、利用蛹虫草大规模化人工培育的优势,以蛹虫草发酵液为原料分离制备虫草素。对蛹虫草的液体培养条件进行改善,提高虫草素在原料中的产量。首先对14个蛹虫草菌株产虫草素情况进行了考察,筛选出高产虫草素菌株CM001。然后以CM001号菌株为试验菌种,研究比较了9种虫草素合成前体物质对虫草素在蛹虫草中合成的影响,通过液体摇瓶培养的方式,分别向培养基中添加各种虫草素的前体物质,结果表明,腺苷、鸟嘌呤、腺嘌呤、甘氨酸、丙氨酸对虫草素的合成均具有促进作用,其中以腺嘌呤的促进作用最显著。以腺嘌呤为添加物,对其添加量和添加时间进行了考察,发现在液体培养的第5天向培养物中添加0.8g/L的腺嘌呤能最大程度上提高虫草素在培养液中的产量,达到未添加前体物质培养时的10倍左右。2、利用大孔吸附树脂分离纯化蛹虫草发酵液中的虫草素。比较了HPD-100、 HPD-400、HPD-500、HPD-722、D101、AB-8、DM130共7种大孔吸附树脂对蛹虫草发酵液中虫草素的吸附与解吸性能,筛选出HPD-100树脂为最佳树脂。进一步研究确定了HPD-100树脂吸附分离虫草素的最佳工艺条件：上样液质量浓度0.6mg/mL、上样流速3BV/h、上样体积6BV；解吸剂为体积分数25%的乙醇溶液、解吸流速2BV/h、解吸体积4BV。根据此工艺条件,蛹虫草发酵液经HPD-100树脂分离除杂后,可获得纯度为12.5%的虫草素粗产品,较发酵液干粉提高了8倍左右。3、以通过大孔吸附树脂分离获得的虫草素粗提物为原料,利用高速逆流色谱分离制备虫草素。首先利用分析型高速逆流色谱对分离虫草素的溶剂体系进行筛选,确定虫草素分离的最佳溶剂体系乙酸乙酯-正丁醇-0.5%氨水(2-3-5),并运用此溶剂体系,通过制备型高速逆流色谱一次从400mg虫草素粗产品中分离制备获得纯度为98.7%的虫草素产品43.8mg。