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研究背景和目的:精神分裂症(SZ)是一种病因未明的重型精神病。多在青壮年缓慢或亚急性起病,具有易复发、慢性化等特点。临床上通常表现为症状各异的综合征,涉及感知觉、思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。WHO全球疾病负担调查报告显示精神分裂症的疾病负担排名占到第七位。该病在中国的发病率为0.6%-1.2%,住院病人占精神病总住院病人的50%以上,造成的疾病负担占总疾病负担的1.3%。精神分裂症为一类多基因遗传病,受多对微效基因和环境因素的共同影响,遗传度为80%。新近统计数据表明,两个精神分裂症患者结婚所生养子女,患病率高达68.1%,为正常人群的100倍。目前精神分裂症病理生理机制的研究主要集中于多巴胺假说、5-羟色胺假说、γ-氨基丁酸和谷氨酸假说。γ-氨基丁酸神经元和谷氨酸神经元均有内源性大麻素受体分布,内源性大麻素可对上述神经元发挥突触前作用,还可通过上述两种神经递质间接对多巴胺神经元产生影响。内源性大麻素系统(ECS)为中枢神经系统(CNS)的重要调节系统,广泛的分布于大脑中,包括杏仁核、额叶皮质区、海马、小脑、丘脑等,内源性大麻素系统主要包括:内源性大麻素受体1(CBR1)、内源性大麻素受体2(CBR2)、花生四烯酸乙醇胺(AEA)配体、花生四烯酸甘油(2-AG)配体以及合成和降解这些配体所需的酶类。花生四烯酸磷脂酰乙醇胺特异性磷脂酶D(NAPE-PLD)为配体AEA“经典合成途径”的关键酶,花生四烯酸乙醇胺水解酶(FAAH)则为AEA降解途径的关键酶。对比研究发现精神分裂症患者血液和脑脊液中内源性大麻素水平发生了一定的改变。内源性大麻素系统各个组分被认为与精神分裂症的发生相关,相关研究正成为精神分裂症病因研究新热点。为了进一步研究探讨NAPE-PLD基因和FAAH基因多态性与河南精神分裂症发生的相关性,本研究选取NAPE-PLD基因rs12540583位点与FAAH基因rs2295633、rs324420、rs6429600位点,使用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)方法,检测河南汉族精神分裂症人群和正常对照人群两基因四位点的基因型分布频率和等位基因分布频率,进行遗传模型和单倍体分析,并分析两基因四位点间交互作用。以期评价两基因四位点对河南汉族精神分裂症的影响,丰富精神分裂症相关分子病因学数据库。研究对象和方法:本研究病例组共345例(196男和149女;平均年龄:37.5±12.35岁),来自2010年10月至2014年4月河南省郑州市精神病医院、洛阳市荣康医院精神分裂症住院患者,均符合中国精神疾病分类与诊断标准第三版(CCMD-3)和美国精神障碍诊断与统计手册第四版(DSM-Ⅳ)诊断标准,且精神分裂症阳性与阴性症状量表(PANSS)评分>45分。排除诊断不明、脑器质病变、精神发育迟缓、癫痫、肝肾功能不全、严重营养不良等患者;排除酒精依赖、其他精神活性物质滥用者等。对照组共403名(225男和178女;平均年龄:35.6±10.0岁)选自河南省同期健康体检的无关随机个体。排除家族有精神疾患或自杀者。年龄和性别在病例组和对照组间分布均没有统计学差异((t=0.61,P>0.05;χ2=1.77,P>0.05)。所有研究对象均获本人或监护人知情同意。本研究采用PCR-RLFP方法:1)采集病例组和对照组外周静脉血,EDTA抗凝,标准酚-氯仿法提取全基因DNA,超微量核酸蛋白测定仪检测样本DNA的浓度和纯度;2)设计并合成引物,利用PCR技术扩增目的基因;3)使用特异性限制性内切酶酶切PCR产物;4)运用2%琼脂糖凝胶电泳分离消化后的DNA片段,使用紫外成像系统拍照并记录,并分析基因型结果;5)随机选取各位点不同基因型PCR产物进行测序验证。使用在线软件(http://ihg.gsf.de/cgi-bin/hw/hwa1.pl)检验Hardy-Weinberg平衡;运用SPSS17.0统计软件通过c2检验分析基因型、等位基因及遗传模型并计算比值比(OR)和95%置信区间(95%CI);运用SHEsis在线软件对单体型进行分析。基因与基因的交互作用则由多因子降维法(MDR)分析完成。统计结果经Bonferroni校正,实际检验水准α=0.0125(0.05/4)。结果:1.rs12540583、rs2295633、rs324420、rs6429600病例组和对照组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P值依次为0.84和0.14、0.33和0.23、0.07和0.06、0.54和0.76,均大于0.05)。2.NAPE-PLD基因rs12540583位点在显性模型下病例组和对照组组基因型分布差异具有统计学意义(χ2=19.77,P<0.0125),在加性模型下两组基因型分布存在显著性差异(χ2=19.87,P<0.0125)。3.NAPE-PLD基因rs12540583位点等位基因在病例组和对照组分布差异具有统计学意义(χ2=18.94,P<0.0125),相对风险分析结果显示C等位基因与精神分裂症的发病风险呈正相关,属于危险因子。4.NAPE-PLD基因rs12540583位点基因型在病例组和对照组分布差异具有统计学意义,以野生型型AA为参照,AC基因型在两组间分布差异均有统计学差异(χ2=17.18,P<0.0125),相对风险分析结果显示AC基因型精神分裂症呈正相关,属于危险基因型。5.FAAH 3个位点(rs2295633、rs324420、rs6429600)单体型分析显示8种单体型在病例组和对照组分布差异均没有统计学意义。6.四种基因交互模型均具有统计学意义(P=0.001),其中一因子模型和四因子模型交叉验证一致性为10/10。且四因子检验样本准确度为最大(76.49%)。故四因子模型为其最佳模型。系统交互树同样显示四位点存在交互作用。结论:1.NAPE-PLD基因rs12540583位点C等位基因以及AC基因型为河南汉族人群精神分裂症的潜在危险因子。2.NAPE-PLD基因rs12540583位点与FAAH基因rs2295633、rs324420和rs6495600位点在河南汉族精神分裂症的发病中存在交互作用。