猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的，主要以母猪发热、厌食、流产、早产及木乃伊胎等，仔猪和生长猪以呼吸系统疾病和高死亡率为特征的接触性传染病。该病传染性强，感染后导致机体的免疫抑制和并发症，病毒基因的变异也给防治增加了难度，给世界养猪业造成了灾难性的损失。糖基化囊膜蛋白5(GP5)是PRRSV的主要结构蛋白之一，具有结合病毒受体及诱导细胞凋亡等功能，该蛋白诱导机体产生的中和抗体具有最强的中和能力，在疫苗制备中意义重大，是研制猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗的优秀候选对象，在研究PRRSV的生理功能及防治过程中也具有重要作用。本研究根据GenBank中收录的PRRSV经典美洲型毒株和中国的高致病性毒株基因序列比对结果，用Primer5.0软件设计特异性引物，利用RT-PCR扩增整个ORF5基因片段，以pMDl8-T为载体对ORF5基因进行克隆。序列测定表明，ORF5基因全长603bp，编码201个氨基酸。根据测序结果设计两对引物(P1/P2，P3/P4)，在P1和P4引物中分别设计EcoRⅤ和HindⅢ酶切位点，在P2和P3引物中均设计BamHⅠ酶切位点。以P1和P2为引物进行PCR扩增，获得缺失31个氨基酸疏水性信号肽的基因片段，以P3和P4为引物进行PCR扩增，获得缺失跨膜功能区（第60～130位氨基酸）的GP5基因片段。利用融合基因克隆技术，将两个片段拼接到原核表达载体pET-30a上，考虑到ORF5基因在被切除和拼接后可能会改变GP5蛋白的某些生物学特性，因此在两个基因片段之间加入了柔性序列以保证表达蛋白的抗原性。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG进行诱导表达，结果得到约18KD的重组蛋白，蛋白大小与预期结果相符。分别用His-兔多克隆抗体和PRRSV阳性血清作为一抗对表达的重组蛋白进行Western-blot检测，结果显示能与重组蛋白反应并且呈现一条特异、清晰的反应条带。将纯化的重组蛋白免疫新西兰兔，兔子能产生针对蛋白的血清抗体，说明表达的重组蛋白是特异的，而且具有良好的免疫原性。由此表明，表达的重组GP5蛋白虽然删除了信号肽和跨膜功能区，但并未影响到GP5蛋白的抗原表位，仍具有良好的生物学活性。重组蛋白制备的抗血清ELISA检测能够与病毒特异性的结合，病毒阻断实验检测能够有效地阻断病毒进入细胞，说明抗血清具有中和病毒的效果。本研究在体外高效表达了重组的PRRSV GP5蛋白，制备并检测抗血清的中和效果，以期为进一步研究GP5蛋白的结构和功能奠定基础。