黑胸散白蚁(Reticulitermes chinese Snyder)肠道纤维素酶GHF7基因的克隆与分析

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纤维素是地球上最为丰富的生物资源,也是人类生活中不可或缺的重要工业原料和可再生性能源。白蚁能够大量分解枯枝落叶中的纤维素,降解土壤有机质,改善土壤的营养,促进物质循环,是自然界纤维素的天然降解者。白蚁对纤维素的降解与其体内不同来源的纤维素酶密切相关。已有的研究表明,白蚁的纤维素酶包括由中肠上皮细胞和唾液腺分泌产生的内源性纤维素酶和来源于不同白蚁肠道共生微生物的外源性纤维素酶。然而,迄今为止,白蚁体内纤维素酶的研究尤其是纤维素降解机制的研究还十分欠缺。本论文以广泛分布于我国的黑胸散白蚁(Reticulitermes chinese Snyder)为研究对象,通过RT-PCR和RACE技术克隆了其后肠肠液中的纤维素酶基因,得到了9个纤维素酶基因的完整开放阅读框,序列长度均为1353 bp,编码451个氨基酸,氨基酸序列之间的同源性达98-99%。根据已得到基因5’和3’端序列设计引物,从后肠肠液DNA直接扩增得到两个长度也为1353 bp的纤维素酶基因,说明黑胸散白蚁基因组中纤维素酶基因没有内含子。通过在GenBank数据库的BLAST分析显示所得到的序列均为纤维素酶基因,属于糖基水解酶家族7(GHF7),与来源于其它几种木食性白蚁后肠鞭毛虫的GHF7基因同源性最高,推测这些纤维素基因来源于黑胸散白蚁后肠肠液中的鞭毛虫。根据基因推导的氨基酸序列与来源于其它白蚁和蟑螂的GHF7家族的纤维素酶具有55%-88%的同源性,其中和栖北散白蚁(Reticulitermes speratus)得到的鞭毛虫来源的纤维素酶同源性最高,达到88%,而与来源于最原始的白蚁,达尔文澳白蚁(Mastotermes darwiniensis)的纤维素酶同源性只有62%,说明白蚁体内纤维素酶与宿主白蚁可能存在共进化的关系。本试验初步研究了黑胸散白蚁纤维素酶GHF7的基因,为进一步综合全面地了解白蚁相关纤维素酶基因的多样性,阐明白蚁降解纤维素的机制奠定了理论基础。对开发利用具有应用价值的高效纤维素酶具有十分重要的意义。
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