粒细胞（Granulocytes）是指带有分叶核和丰富的胞质颗粒的细胞，是固有免疫系统的重要组成部分。传统观点认为，粒细胞主要在抵御微生物攻击中发挥作用，而在抗肿瘤免疫中作用则不大。近年来一系列动物模型的研究证据表明，某些小鼠来源的粒细胞具有很强的抗肿瘤活性，提示粒细胞作为新型抗肿瘤效应细胞的潜力。但是动物模型中的发现是否适用于人类，能否从在健康人群中筛选出具有肿瘤杀伤活性（cancer killer activity, CKA）的粒细胞，从而应用于肿瘤临床治疗，是一个有待探讨的问题。为此，我们从21名健康志愿者的全血中分离粒细胞，筛选出CKA粒细胞，初步研究CKA粒细胞的体外抗肿瘤作用及机制，并探讨人CKA细胞群体与不具有CKA粒细胞群体的分子差异，为肿瘤的细胞治疗提供新思路。目的：从21个样本中筛选CKA粒细胞，确定筛选获得的CKA粒细胞的体外抑瘤效应及抗肿瘤的可能机制，探讨人源CKA细胞群体与不具有肿瘤杀伤活性粒细胞群体的分子差异。方法：1、CKA粒细胞的筛选：收集21份健康志愿者外周抗凝全血，从中分离粒细胞；分别将其与人肺癌A549细胞共培养，应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖活性，筛选CKA粒细胞。2、CKA粒细胞的体外抗肿瘤作用：通过CCK-8法，分别检测在不同效靶比、直接接触的共培养条件下，筛选获得的CKA粒细胞对正常人细胞株、肿瘤细胞株的体外杀伤作用。3、CKA粒细胞的体外抗肿瘤机制：在不同效靶比、直接接触的共培养条件下，通过双染法检测肿瘤细胞凋亡；分别采用直接接触、Transwell共培养、条件培养液等共培养细胞方式，比较不同处理方式下，CKA粒细胞对肿瘤细胞的抑制作用。4、CKA细胞与不具有CKA粒细胞的差异分析：分别应用Real time PCR与ELISA的方法检测CKA粒细胞与不具有CKA粒细胞之间TGFβ1mRNA表达量及蛋白含量的差异；应用TGFβ受体抑制剂Ly-364947阻断TGFβ1受体，观察处理后粒细胞抗肿瘤效应的变化。结果：1、21个样本中，有6个样本粒细胞克隆对肺癌细胞株A549具有明显的抑制作用，CKA的比例为28.57%，其中克隆3对A549的抑制作用最强。2、克隆3的CKA粒细胞对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2和人宫颈癌细胞Hela具有明显抑制作用，而对正常人成纤维细胞株MRC-5基本无抑制作用；CKA粒细胞的抑瘤效应随着效靶比的提高而增强。3、在直接接触后，克隆3的CKA粒细胞能诱导A549、HepG2、Hela细胞凋亡；三种处理方式的抑制效率比较：直接接触＞Transwell＞条件培养。4、相对于不具有肿瘤杀伤活性粒细胞，CKA粒细胞中TGFβ1表达量（包括RNA水平与蛋白水平）显著性降低（P＜0.05）；经TGFβ受体抑制剂（LY-364947）处理，CKA粒细胞的抗肿瘤作用增强；其增强效应与抑制剂使用浓度正相关。结论：1、与动物模型的结果类似，一定比例人体内也存在着CKA粒细胞。2、CKA粒细胞对不同肿瘤细胞及正常细胞的杀伤作用具有一定选择性。3、CKA粒细胞能高效诱导肿瘤细胞的凋亡，其对肿瘤细胞的杀伤需要直接接触。相对于不具有肿瘤杀伤活性粒细胞，CKA粒细胞中TGFβ1表达量低，抑制TGFβ1有助于增强CKA粒细胞的抗肿瘤作用。4、CKA粒细胞对肿瘤细胞的杀伤作用可能与其对肿瘤细胞的趋化、粘附作用有关。5、增加肿瘤微环境中的CKA粒细胞数量和活性，有可能成为肿瘤治疗的一种新途径。