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目的:探讨淫羊花对良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia,BPH)模型大鼠的治疗作用及对自噬蛋白Beclin-1、LC3表达的影响;完善中药淫羊藿干预良性前列腺增生的作用机制;为临床疾病研究提供理论依据和一定的实验基础。
方法:通过予以SPF级成年雄性SD大鼠颈背部注射外源性雄激索(丙酸舉丸酮注射液)28d的方法建立大鼠良性前列增生模型，确定造模成功后,空白组不变，其余大鼠随机分为模型对照组，非那雄胺组、淫羊藿低、中高剂量组.空白组不做任何处理、正常饲养:模型对照组继续给予颈背部皮下注射丙酸皋丸酮，同时予以生理盐水1.0ml.kg-1灌胃:非那雄胺组按1mg.kg-1浓度配成混悬液灌胃;淫羊翟低、中、高剂量组根据体表面积和人与动物临床剂量倍数换算,结合大鼠一次性灌胃剂量将炙淫羊藿煎成低、中、高剂量分别为0.104g.ml-1、0.208g.ml-1、0.414g.ml-1生药浓度灌胃;各用药组滥胃体积均为1ml/100g,连续滞胃干预42d.造模及给药过程中观察记录各组大鼠的日常情况(包括体重变化、饮食、二便、毛色转变、精神状态、运动状况、膀胱尿路症状等);完成给药治疗后摘取各组大鼠前列腺组织，分别比较前列腺湿重，体积变化，计算前列腺指数(PI);苏木精-伊红染色法(HE)观察各组大鼠前列腺组织镜下形态结构；免疫组织化学染色法(IHC)检测各组大鼠前列腺组织中Beclin-1、LC3自噬相关蛋白表达情况:蛋白质印迹法(WB)检测各组大鼠前列腺组织中自噬蛋白Becl in-1、LC3的表达:实时荧光定量(RT-qPCR)检测各组大鼠前列腺组织中Beel in-1、LC3mRNA表达.
结果:1.采用未去势雄性SD大鼠颈背部注射外源性雄激素(即丙酸睾丸酮注射液)5mg.kg-1的方法，连续给药28d后.实验相关数据显示模型对照组与空白组比较，前列腺体积，湿重和前列腺指数均显著增高(P＜0.01)，提示此方法可成功复制BPH大鼠模型.
2.各组大鼠体重比较显示:与模型对照组比较，淫羊花高剂量组体重增加，具有明显统计学差异(P＜0.01)，而其余各组之间无统计学差异.
3.各组大鼠前列腺体积、前列腺湿重、前列腺指数对比显示:与模型对照组相比，淫羊藿高、中、低剂量组均对BPH大鼠具有明显治疗作用(P＜0.01),均可缩减BPH前列腺组织体积、减轻BPH前列腺组织湿重、降低BPH前列腺指数，尤以淫羊蕾低剂量治疗效果最为显著.
4.HE染色检测结果显示:空白组腺上皮细胞排列成单层，腺体管腔扩大,平滑肌、纤维组织无增生.模型对照组前列腺组织增生明显,腺上皮细胞增多呈乳头状向腺腔内突出,腺上皮细胞大都成高柱状,腺泡萎缩,腺体管腔明显缩小，纤维组织大量增生.淫羊蕾高剂量组和模型组相比，腺上皮细胞仍有部分增多呈乳头状向腺腔内突出，部分腺泡仍紧缩，腺体管腔大部分恢复正常。淫羊蕾中剂量组较模型对照组明显好转，腺上皮细胞多排列为单层，偶见乳头状凸起，腺体管腔基本恢复正常,腺泡基本恢复正常大小.淫羊藿低剂量组和模型对照组相比,增生现象均显著减轻,腺上皮细胞多排列为单层，腺体管腔恢复正常，纤维组织无明显增生。
5.免疫组化检测结果显示:空白组大鼠前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3主要在腺泡腔周围细胞胞浆呈现低表达。与空白组相比，模型对照组自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均明显上调(P＜0.01);各治疗组与模型对照组相比,前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均显著下调(P＜0.01)，尤其是淫羊藿低剂量组自噬蛋白Bclin-1、LC3呈现明显低表达(P＜0.01).
6.Westerm Blot检测结果显示:与空白组相比,模型对照组自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均明显上调(P＜0.01);各治疗组与模型对照组相比，前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均明显下调(P＜0.01)，尤其是淫羊藿低剂量组自噬蛋白Beclin-1、LC3呈现明显低表达(P＜0.01).
7.RT-qPCR结果显示:与空白组相比,模型对照组自噬蛋白Beclin-1、LC3mRNA表达均明显上调(P＜0.01);各治疗组与模型对照组相比，前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1mRNA呈显著下调(P＜0.01)，LC3mRNA表达下调(P＜0.05或P＜0.01)，尤其是淫羊藿低剂量组自噬蛋白Beclin-1、LC3mRNA均呈现明显低表达(P＜0.01)。
结论:认为自噬现象普遍存在于正常前列腺组织中.机体通过自体细胞自噬,不断适应微观环境.在良性前列腺增生性疾病发展过程中，自噬相关蛋白Beclin-1、LC3均显著表达于腺泡腔周围细胞胞浆，证实BPH的发生发展与自噬密切相关,其作用机制可能与过度的非生理性自噬激活、促进自噬依赖性细胞死亡有关。本实验研究发现中药淫羊董高、中、低剂量均对良性增生前列腺组织有明显治疗作用，其中，淫羊藿低剂量治疗效果最为显著，可明显缩小BPH前列腺组织体积、减轻BPH前列腺组织湿重、降低BPH前列腺指数，且这种治疗作用可能与其在蛋白层面下调良性前列腺增生组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3表达，在mRNA层面降低自噬蛋白Beclin-1、LC3表达，抑制过度自噬有关,进一步阐明了淫羊蕾干预良性前列腺增生的相关机制，为补阳益肾中药临床治疗B PH提供了一定的药理学依据和前期实验基础,有利于进-步进行后续细胞研究.
方法:通过予以SPF级成年雄性SD大鼠颈背部注射外源性雄激索(丙酸舉丸酮注射液)28d的方法建立大鼠良性前列增生模型，确定造模成功后,空白组不变，其余大鼠随机分为模型对照组，非那雄胺组、淫羊藿低、中高剂量组.空白组不做任何处理、正常饲养:模型对照组继续给予颈背部皮下注射丙酸皋丸酮，同时予以生理盐水1.0ml.kg-1灌胃:非那雄胺组按1mg.kg-1浓度配成混悬液灌胃;淫羊翟低、中、高剂量组根据体表面积和人与动物临床剂量倍数换算,结合大鼠一次性灌胃剂量将炙淫羊藿煎成低、中、高剂量分别为0.104g.ml-1、0.208g.ml-1、0.414g.ml-1生药浓度灌胃;各用药组滥胃体积均为1ml/100g,连续滞胃干预42d.造模及给药过程中观察记录各组大鼠的日常情况(包括体重变化、饮食、二便、毛色转变、精神状态、运动状况、膀胱尿路症状等);完成给药治疗后摘取各组大鼠前列腺组织，分别比较前列腺湿重，体积变化，计算前列腺指数(PI);苏木精-伊红染色法(HE)观察各组大鼠前列腺组织镜下形态结构；免疫组织化学染色法(IHC)检测各组大鼠前列腺组织中Beclin-1、LC3自噬相关蛋白表达情况:蛋白质印迹法(WB)检测各组大鼠前列腺组织中自噬蛋白Becl in-1、LC3的表达:实时荧光定量(RT-qPCR)检测各组大鼠前列腺组织中Beel in-1、LC3mRNA表达.
结果:1.采用未去势雄性SD大鼠颈背部注射外源性雄激素(即丙酸睾丸酮注射液)5mg.kg-1的方法，连续给药28d后.实验相关数据显示模型对照组与空白组比较，前列腺体积，湿重和前列腺指数均显著增高(P＜0.01)，提示此方法可成功复制BPH大鼠模型.
2.各组大鼠体重比较显示:与模型对照组比较，淫羊花高剂量组体重增加，具有明显统计学差异(P＜0.01)，而其余各组之间无统计学差异.
3.各组大鼠前列腺体积、前列腺湿重、前列腺指数对比显示:与模型对照组相比，淫羊藿高、中、低剂量组均对BPH大鼠具有明显治疗作用(P＜0.01),均可缩减BPH前列腺组织体积、减轻BPH前列腺组织湿重、降低BPH前列腺指数，尤以淫羊蕾低剂量治疗效果最为显著.
4.HE染色检测结果显示:空白组腺上皮细胞排列成单层，腺体管腔扩大,平滑肌、纤维组织无增生.模型对照组前列腺组织增生明显,腺上皮细胞增多呈乳头状向腺腔内突出,腺上皮细胞大都成高柱状,腺泡萎缩,腺体管腔明显缩小，纤维组织大量增生.淫羊蕾高剂量组和模型组相比，腺上皮细胞仍有部分增多呈乳头状向腺腔内突出，部分腺泡仍紧缩，腺体管腔大部分恢复正常。淫羊蕾中剂量组较模型对照组明显好转，腺上皮细胞多排列为单层，偶见乳头状凸起，腺体管腔基本恢复正常,腺泡基本恢复正常大小.淫羊藿低剂量组和模型对照组相比,增生现象均显著减轻,腺上皮细胞多排列为单层，腺体管腔恢复正常，纤维组织无明显增生。
5.免疫组化检测结果显示:空白组大鼠前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3主要在腺泡腔周围细胞胞浆呈现低表达。与空白组相比，模型对照组自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均明显上调(P＜0.01);各治疗组与模型对照组相比,前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均显著下调(P＜0.01)，尤其是淫羊藿低剂量组自噬蛋白Bclin-1、LC3呈现明显低表达(P＜0.01).
6.Westerm Blot检测结果显示:与空白组相比,模型对照组自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均明显上调(P＜0.01);各治疗组与模型对照组相比，前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3表达均明显下调(P＜0.01)，尤其是淫羊藿低剂量组自噬蛋白Beclin-1、LC3呈现明显低表达(P＜0.01).
7.RT-qPCR结果显示:与空白组相比,模型对照组自噬蛋白Beclin-1、LC3mRNA表达均明显上调(P＜0.01);各治疗组与模型对照组相比，前列腺组织中自噬蛋白Beclin-1mRNA呈显著下调(P＜0.01)，LC3mRNA表达下调(P＜0.05或P＜0.01)，尤其是淫羊藿低剂量组自噬蛋白Beclin-1、LC3mRNA均呈现明显低表达(P＜0.01)。
结论:认为自噬现象普遍存在于正常前列腺组织中.机体通过自体细胞自噬,不断适应微观环境.在良性前列腺增生性疾病发展过程中，自噬相关蛋白Beclin-1、LC3均显著表达于腺泡腔周围细胞胞浆，证实BPH的发生发展与自噬密切相关,其作用机制可能与过度的非生理性自噬激活、促进自噬依赖性细胞死亡有关。本实验研究发现中药淫羊董高、中、低剂量均对良性增生前列腺组织有明显治疗作用，其中，淫羊藿低剂量治疗效果最为显著，可明显缩小BPH前列腺组织体积、减轻BPH前列腺组织湿重、降低BPH前列腺指数，且这种治疗作用可能与其在蛋白层面下调良性前列腺增生组织中自噬蛋白Beclin-1、LC3表达，在mRNA层面降低自噬蛋白Beclin-1、LC3表达，抑制过度自噬有关,进一步阐明了淫羊蕾干预良性前列腺增生的相关机制，为补阳益肾中药临床治疗B PH提供了一定的药理学依据和前期实验基础,有利于进-步进行后续细胞研究.