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孔雀石绿残留在水产品中和环境中存在时间长,具有毒性高,残留高及潜在的致畸、致癌、致突变等危险性,美国、欧盟对水产品中孔雀石绿的使用都有明确的规定,我国已将孔雀石绿列在禁用兽药名单中,禁止用于全部食品动物中。目前,孔雀石绿的含量一般都是使用仪器进行测定,但这些方法测定流程复杂、耗时长、成本高。试纸条测定具有易操作,费时短,成本低等优点,适于现场检测和筛查。本试验以孔雀石绿为研究对象,利用胶体金免疫层析技术,研制出用于检测孔雀石绿的免疫层析试纸条,并将其用于水产品检测。采用磁力搅拌器加热方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备出了不同粒径的胶体金溶液,粒径在26 nm左右的胶体金标记孔雀石绿抗体的显色效果较好,最适p H为0.2 mol/L K2CO3添加量为4μL/m L,抗体加入量为15μg/m L,稳定剂加入量为30μL/m L的10%BSA。选用样品垫GL-b01、金标垫GL0194、吸水垫H5076和Millipore公司135硝酸纤维素膜为试纸条材料,金标抗体稀释4×包被于金标垫上,检测线和质控线上分别用2.5 mg/m L的孔雀石绿-BSA结合物和0.1 mg/m L的羊抗鼠Ig G平行定量喷涂于硝酸纤维素膜上。试纸条对孔雀石绿标准品用目测比色法的检出限为10 ng/m L。试纸条对无色孔雀石绿、氯霉素、甲基蓝、四环素等物质无交叉反应,与结晶紫交叉反应率为66.7%,特异性和稳定性较好。应用试纸条检测水产品阴性样品,假阳性率为0%;阴性样本不同加标量的测定结果与液相色谱-串联质谱仪测定结果符合性较好,回收率为60%~80%,在实际样品测定时,孔雀石绿浓度大于25 ng/g时,试纸条能准确测定;当阴性样本孔雀石绿添加浓度为50 ng/g时,试纸条测定结果假阴性率为0%。该试纸条检测结果稳定、易于识别,可作为初步筛选孔雀石绿在水产品中残留的有效手段,也可以为其它农残兽残快速检测试纸条的研制提供参考。